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作者：李红洋;华贝杰;姜巨全;
单位：东北农业大学生命科学学院;
摘要：UPF0118蛋白是一种新型Na~+(Li~+)/H~+逆向转运蛋白，属于AI-2E超家族，目前已被划分至Na~+/H~+逆向转运蛋白亚家族，但无直接证据表明该蛋白可与Na~+产生相互作用。为鉴定UPF0118蛋白是否具有Na~+结合功能，利用PCR技术扩增upf0118基因编码序列，通过Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点构建至原核表达载体p ETDuet-1，转化至E. coli BL21*(DE3)，对诱导后大量表达的蛋白进行Ni2~+亲和层析和凝胶过滤层析，利用等温滴定量热技术对纯化蛋白进行滴定。结果表明，在pH 5.5条件下，Na~+滴入导致蛋白溶液产生明显放热现象。在pH 5.5条件下该蛋白具有Na~+结合功能，证明该蛋白Na~+结合功能为其功能单元与分子机制的研究奠定基础。
关键词：UPF0118;;Na~+/H~+逆向转运蛋白;;等温滴定量热法;;蛋白纯化
基金资助：国家自然科学基金联合基金重点项目（U23A20143）;国家自然科学基金面上项目（32070031,31770051）
