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作者：孙姗;潘英杰;谭劲松;杨航;彭利红;冯刚;刘康;宋桂芹;
单位：川北医学院基础医学与法医学研究所;南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院组织工程与干细胞研究所;
摘要：本研究旨在探讨胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白1(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 1, IGF2BP1)对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)细胞体外功能的影响及其作用机制。利用TIMER2.0数据库、免疫组化及实时定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)分析IGF2BP1在ESCC组织和癌旁组织中的蛋白及mRNA水平。采用siRNA敲低IGF2BP1在KYSE30和TE-1细胞中的表达，利用CCK-8实验、平板集落形成实验、划痕愈合实验、 Transwell实验以及流式细胞术检测敲低IGF2BP1对细胞功能的影响。利用Western blot检测敲低IGF2BP1对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白及PI3K/AKT通路磷酸化水平的影响。利用STRING、 GEPIA数据库筛选出与IGF2BPl蛋白互作的其余N~6-甲基腺嘌呤(N~6-methyladenosine, m~6A)甲基化酶并进行差异表达分析。通过RM2Target、 SRAMP数据库预测下游靶基因及其m~6A修饰位点。结果显示，IGF2BP1在ESCC组织和细胞中高表达(P<0.05或P<0.001);敲低IGF2BP1后KYSE30和TE-1细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱(P<0.05或P<0.001),细胞凋亡增多(P<0.05或P<0.001),同时促进E-cadherin的表达(P<0.05或P<0.01),抑制N-cadherin、 Vimentin的表达(P<0.05或P<0.01)以及PI3K/AKT通路的磷酸化(P<0.05或P<0.01);锌指CCCH结构域蛋白13(zinc finger CCCH domain containing protein 13, ZC3H13)与IGF2BP1蛋白互作且在ESCC中的表达水平与IGF2BP1正相关；ZC3H13和IGF2BP1共同调控的潜在靶基因CNNM2、KIAA1549、SP3均具有高可信度的m~6A修饰位点。本研究提示，IGF2BP1可能通过m~6A依赖的方式与其余m~6A甲基化酶协调作用，激活PI3K/AKT通路的磷酸化而促进ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭，抑制细胞凋亡，并促进EMT进程，发挥致癌作用。
关键词：食管鳞状细胞癌;胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1);N~6-甲基腺嘌呤(m~6A);增殖;侵袭;凋亡
基金资助：国家自然科学基金(82203851); 四川省自然科学基金(2023NSFSC0731); 四川省科技厅省院省校合作项目(2023YFSY0045)共同资助
