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作者：李佳宇;绳秀珍;唐小千;邢婧;迟恒;战文斌;
单位：中国海洋大学水产动物病害与免疫学实验室,海水养殖教育部重点实验室;
摘要：为了丰富大口黑鲈病毒(Largemouth bass virus, LMBV)的流行病学资料，深入理解病毒的特性及致病机理，本文从山东省烟台市某养殖场采集了患病的大口黑鲈(Micropterus salmoides),采用细胞培养、PCR扩增及系统进化分析等方法进行病原的分离鉴定。肉眼可见患病大口黑鲈多处出现红肿出血的症状，显微镜检查未发现寄生虫和细菌感染。将病鱼组织匀浆液接种鲤上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprini, EPC),出现明显的细胞病变；对EPC细胞进行透射电镜观察，在细胞质内发现直径约为150 nm的成熟病毒粒子，病毒粒子呈现虹彩病毒典型的正六边形结构。根据NCBI公布的蛙病毒的主要衣壳蛋白(Major capsid protein, MCP)基因序列设计引物，经PCR扩增和测序后得到一段长度为1 392 bp的基因序列。对获得的MCP序列进行系统进化分析，发现该病毒株与蛙病毒属的其他13种病毒聚成一支，与Santee-Cooper蛙病毒(SCRV)、鳜鱼虹彩病毒(MRV)、大口黑鲈溃疡综合征病毒(LBUSV)等7株病毒的MCP序列同源性高达100%。向健康大口黑鲈腹腔注射200μL的10~5 TCID_(50)/mL的病毒液，7 d的累计死亡率可达100%。研究结果表明，我们分离到的病毒为虹彩病毒科蛙病毒属成员，将该病毒株命名为大口黑鲈蛙虹彩病毒LMBV-CN2022株。对病鱼组织进行病理学观察，石蜡切片苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin, H&E)染色结果显示肝、脾、肾组织中出现大量铁血黄素沉积，透射电镜结果显示脾和体肾中存在病毒粒子。
关键词：大口黑鲈;;蛙病毒;;分离鉴定;;组织病理
基金资助：国家重点研究发展计划项目(2023YFD2400701);; 国家自然科学基金项目(32273163,31872599)资助~~
