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作者：张淑雯;陈梓杰;余蓉;张纯;
单位：四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室;
摘要：目的 研究长效纳米抗体7D12与白蛋白结合肽融合蛋白(7D12-ABD)在原核体系内的可溶表达水平，并初步评价其活性。方法 通过与SUMO促溶标签融合表达，构建白蛋白结合肽融合表皮生长因子受体(EGFR)纳米抗体7D12重组表达载体(pET-32a-His-SUMO-7D12-ABD),用镍亲和层析、疏水层析分离纯化7D12-ABD,采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱、圆二色光谱和荧光光谱表征其结构，并通过与人血清白蛋白(HSA)和EGFR体外结合实验评价其活性。结果 7D12-ABD约80%以可溶形式存在于破菌上清液中，获得纯度>95%的融合蛋白。7D12-ABD的分子量和结构折叠正确，能与HSA按1:1结合，与EGFR结合的半数最大效应浓度为5.533 ng·mL~(-1)。结论 通过SUMO标签可成功实现7D12-ABD在原核系统胞内的可溶表达；7D12-ABD在体外能与HSA和EGFR高效结合。
关键词：纳米抗体;;表皮生长因子受体;;白蛋白结合肽;;可溶表达;;层析纯化;;重组蛋白
基金资助：国家自然科学基金资助项目(批准号：82003685);; 四川省科学技术厅项目(2021YJ0187;2024NSFSC0630)
