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作者：李莉;余婧;王仁刚;杨春元;林世锋;朱秀;叶子;李国红;陈越男;吴沙沙;
单位：贵州师范大学生命科学学院;贵州省烟草科学研究院/烟草行业烟草分子遗传重点实验室;
摘要：【目的】克隆拟松材线虫类毒液过敏原蛋白(VAP)基因Bm-vap-1,并进行表达特性分析，为深入研究Bm-vap-1基因在拟松材线虫与寄主互作过程中的作用提供参考。【方法】以拟松材线虫体前端特异cDNA文库构建和测序获得的VAP基因片段为基础，通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到该基因的全长cDNA序列，将其命名为Bm-vap-1。利用生物信息学软件预测Bm-VAP-1蛋白的理化性质、信号肽和跨膜区，并通过生物数据库对其同源性和保守结构域进行分析。然后利用实时荧光定量PCR检测该基因在拟松材线虫不同虫态中的表达水平，并利用原位杂交技术进行转录组表达定位。【结果】Bm-vap-1基因开放阅读框序列长度为621 bp,编码206个氨基酸，GenBank登录号为GU451046。编码蛋白质的分子质量为22.49 ku,理论等电点为4.61,与松材线虫、豆伞滑刃线虫和冲绳伞滑刃线虫VAP同源蛋白的序列一致性较高，含有1个典型且保守的CAP结构域，存在信号肽，无跨膜结构域，属于分泌型蛋白。实时荧光定量PCR结果显示，Bm-vap-1基因在拟松材线虫各个虫态中均有表达，但在成虫中的表达量较高。原位杂交结果表明，Bm-vap-1基因在拟松材线虫的食道腺特异表达。【结论】成功克隆了拟松材线虫Bm-vap-1基因，初步推测其编码蛋白在线虫食道腺合成，且在线虫寄生过程中分泌到体外发挥作用。
关键词：拟松材线虫;;类毒液过敏原蛋白;;生物信息学;;表达水平;;原位杂交
基金资助：国家自然科学基金项目(32060342);; 贵州师范大学学术新苗基金项目(黔师新苗[2021]A13号);; 贵州省林业科研项目(黔林科合[2014]02号);; 中国烟草总公司贵州省公司科技项目(2023XM04)
