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作者：杨丹;牛奎举;
单位：青海理工学院生态与环境科学学院/青海省高原气候变化及其生态环境效应重点实验室;甘肃农业大学草业学院/草业生态系统教育部重点实验室;
摘要：D27(DWARF 27)基因编码一种含铁的β-胡萝卜素异构酶，参与植物激素独脚金内酯的合成。本研究以‘岷山红三叶’为材料，采用RT-PCR技术克隆了TpD27基因。该基因开放阅读框792 bp，编码264个氨基酸，蛋白质相对分子量29.71 kD，等电点为8.76，不稳定系数51.30，属于不稳定蛋白；亚细胞定位预测显示，该蛋白位于叶绿体；TpD27蛋白二级结构主要由α螺旋（33.71%）和无规则卷曲（55.68%）构成，与空间结构预测结果高度一致；系统发育树分析显示，TpD27蛋白与蒺藜苜蓿MtD27属于同一分支，亲缘关系最近。时空表达分析显示，TpD27基因表达具有明显的组织特异性，在花中表达量最高，根中表达量最低。非生物胁迫表达分析显示，TpD27基因表达量在镉、盐和干旱胁迫下显著下调，在低温胁迫下呈先下调后上调再下调趋势。本研究构建pCAMBIA2300-TpD27过表达载体，采用农杆菌介导花序浸染法转化拟南芥发现，过表达TpD27转基因拟南芥植株的分枝数显著低于野生型。
关键词：红三叶;;TpD27基因;;表达分析;;基因克隆;;遗传转化
基金资助：青海理工大学（筹）“昆仑英才”人才引进科研项目（2023-QLGKLYCZX-013）;; 青海理工学院论文延伸项目（202302lwys011）
