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作者：王彦博;思越;贾庭玮;王韵乐;马宏炜;程林峰;张芳琳;
单位：空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室;延安大学生命科学学院;
摘要：目的 探讨单核细胞在汉滩病毒(HTNV)感染致血管内皮细胞功能异常中的作用及调控机制。方法 构建基于Transwell~(TM)小室的体外共培养模型[中层接种人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)、下层接种HEK293细胞、上层接种外周血单个核细胞(PBMC)或去除单核细胞的PBMC],采用贴壁法去除PBMC中的单核细胞并利用流式细胞术检测去除效果；Western blot法检测组织细胞中HTNV核衣壳蛋白(NP)表达以评估单核细胞对病毒复制水平的影响；进一步利用Bio Plex悬液芯片系统及流式细胞术分别检测共培养模型中细胞因子分泌及T细胞活化水平；采用跨膜电阻(TER)法检测去除单核细胞或添加抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)中和抗体后HUVEC通透性；探究单核细胞是否可通过影响免疫微环境稳态进而加重HTNV感染后内皮细胞损伤。结果 去除单核细胞显著促进HEK293细胞及HUVEC中HTNV NP表达；同时，小室上层培养液中TNF-α、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6等促炎细胞因子水平显著降低，且去除单核细胞的PBMC中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、 1型辅助T (Th1)、 Th2、 Th17细胞活化水平下降；单核细胞去除后HUVEC跨膜电阻值下降趋势减缓，而抗TNF-α中和抗体可逆转单核细胞介导的内皮通透性增加。结论 本研究在方法学上改良Transwell~(TM)实验，更好的模拟了在体环境中HTNV感染的进程，揭示了单核细胞在HTNV感染致血管内皮细胞损伤中核心的、具有双重性质的调控作用：既可抑制HTNV在组织细胞中的复制，又可通过分泌TNF-α等促炎细胞因子、促进T细胞活化，增加血管内皮通透性；干预TNF-α可显著缓解HTNV感染诱导的内皮细胞损伤。
关键词：外周血单个核细胞(PBMC);;汉滩病毒;;单核细胞;;细胞通透性;;肿瘤坏死因子α(TNF-α)
基金资助：国家自然科学基金面上项目(82371835)
