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作者：鲁毅;张玮函;杨馥瑜;贾立敏;王鹤霏;关启颜;何子瞻;刘梅;吕岩红;
单位：中国人民解放军东部战区空军医院药剂科;哈尔滨医科大学基础医学院解剖教研室;
摘要：目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)联合低强度超声(LIUS)对人肝癌HepG2细胞杀伤效应及其作用机制。方法 利用LIUS(频率1.0 MHz,强度0.5 W/cm~2,占空比20%)联合5-FU作用于人肝癌HepG2细胞系，采用多功能酶标仪测定细胞内5-FU药物含量，MTT法检测肿瘤细胞活力，Annexin V/PI染色、流式细胞术检测细胞凋亡率，偏振光荧光法检测细胞膜的流动性，Western blot法与免疫荧光染色检测核苷转运蛋白1(ENT-1)及P-糖蛋白(P-gp)的表达水平，免疫荧光染色检测钙网蛋白(CRT)和细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达。结果 LIUS能够显著增强HepG2细胞内5-FU的积累。与无处理组或单独应用5-FU相比，LIUS联合5-FU可显著降低HepG2细胞的活性，增强细胞早期及总细胞凋亡率；显著增加了HepG2细胞膜的流动性；显著上调介导药物转运进入肿瘤细胞的ENT-1的表达并抑制参与药物外排蛋白P-gp的表达；免疫原性细胞死亡(ICD)标志物CRT外翻，HMGB1从细胞核释放到胞质和胞外。结论 LIUS促进5-FU在肝癌HepG2细胞中的药物累积；5-FU联合LIUS通过正向调控药物细胞内转运蛋白ENT-1和负向调控耐药蛋白P-gp的表达，明显增强5-FU对肝癌细胞HepG2的杀伤效应，并诱导细胞免疫原性死亡。
关键词：免疫原性细胞死亡(ICD);;肝癌;;低强度超声;;5-氟尿嘧啶(5-FU);;膜流动性;;膜转运蛋白
基金资助：国家自然科学基金资助项目(81703040);; 装备综合科学研究项目(KJ2023C001-D029)
