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作者：汪先晨;尤峻柏;凌辉;范家好;陈齐;陶辉;沙纪名;
单位：安徽医科大学第二附属医院胸外科;安徽医科大学第二附属医院麻醉与围手术期医学科;
摘要：目的 探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法 为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织，剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml TGF-β_1作用24 h诱导PFs细胞活化，并用小干扰RNA构建DNMT3A沉默模型；实验分为Control组、TGF-β_1组、TGF-β_1+siRNA-NC组和TGF-β_1+siRNA-DNMT3A组。应用Western blot方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达变化；应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测DNMT3A、α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达变化；CCK-8与EdU染色检测PFs增殖能力；划痕实验与Transwell迁移实验检测PFs迁移能力。结果 与Control组相比，TGF-β_1诱导活化的PFs细胞组中DNMT3A升高(P<0.01),纤维化与增殖相关指标α-SMA、CollagenⅠ的蛋白及mRNA水平也升高(均P<0.05),同时PFs的增殖与迁移能力升高(均P<0.000 1)。而与siRNA-NC组相比，在DNMT3A沉默组中通过Western blot法检测DNMT3A(P<0.000 1)及相关指标α-SMA(P<0.01)、CollagenⅠ(P<0.01)的蛋白表达水平均降低，同时通过RT-qPCR法检测DNMT3A、α-SMA及CollagenⅠ的mRNA水平也均降低(P<0.001),并且PFs细胞的增殖(P<0.01)和迁移能力(P<0.05)较对照组下降。结论 沉默DNMT3A能够抑制胶原的沉积及PFs的增殖，DNMT3A可以促进PFs的增殖和迁移能力，进而促进PFs的活化以及肺纤维化的发展，这一过程可能受到DNA甲基化修饰的调控。
关键词：DNMT3A;DNA甲基化;肺成纤维细胞;增殖;迁移;肺纤维化
基金资助：安徽省高校自然科学研究项目(编号：2023AH040376)~~
