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作者：夏潇潇;王佳琳;李玲;佰伍加;宋志贤;岳恒;曹少先;袁玉国;
单位：扬州大学兽医学院/扬州大学动物基因工程重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;扬州大学医学院;江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省畜禽精准育种工程研究中心/农业农村部种养结合重点实验室;
摘要：为探明海门山羊不同组织中肌肉生长抑制素(MSTN)基因表达规律及其编码蛋白结构特点，通过克隆海门山羊MSTN基因CDS序列并分析其生物特点，运用实时荧光定量PCR技术分析MSTN基因在不同组织中的表达水平，在MSTN基因第2、3外显子上设计3个单碱基编辑靶位点，将构建的sgRNA质粒分别与胞嘧啶碱基编辑器YE1-BE3-FNLS电转入培养的海门山羊胎儿成纤维细胞中，筛选48 h后提取细胞基因组DNA,对PCR扩增靶位点序列进行Sanger测序和TA克隆分析。结果：海门山羊MSTN基因的CDS序列编码375个氨基酸，具有高度保守性。海门山羊不同组织中MSTN基因表达水平存在差异，其中骨骼肌的表达量最高；3条sgRNA均可在MSTN基因外显子上进行单碱基编辑，编辑效率分别为25%、37%和29%。结论：研究结果为进一步利用单碱基基因编辑技术培育MSTN基因突变海门山羊新品系提供了新的依据。
关键词：海门山羊;肌肉生长抑制素;单碱基编辑
基金资助：江苏省种业振兴“揭榜挂帅”项目(JBGS[2021]025); 江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD); 高等学校学科创新引智计划项目(D18007); 扬州市市校合作专项(YZ2023205)
