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作者：秦海斌;包喜军;朱骞;陈舒;贺星亮;
单位：南京警察学院/警犬技术公安部重点实验室;
摘要：为开展H3N2亚型犬流感的血清流行病学调查，本研究拟原核表达犬流感病毒(CIV)血凝素1(HA1)基因，建立一种灵敏、准确、稳定的ELISA检测方法。对地方毒株的HA1基因进行氨基酸序列优化，采用化学合成法合成目的基因，插入pET30a中并转化至大肠杆菌表达，对蛋白进行纯化、鉴定，建立CIV间接ELISA方法。结果显示：优化后的HA1基因序列密码子对原核表达系统的CAI指数升至0.88,无复杂二级结构，蛋白可获得高效表达；原核表达后蛋白主要存在于包涵体中，经纯化、复性后的蛋白具备作为诊断抗原的应用价值；建立的间接ELISA方法检测国内采集的1 690份犬血清，显示H3N2亚型CIV整体阳性率为9.23%,与商品化试剂盒符合率为97.9%。提示：建立的间接ELISA方法可靠，具备良好的应用前景。
关键词：犬流感;H3N2;血凝素1;原核表达;间接ELISA
基金资助：中央高校基本科研业务费专项资金项目(LGZD202406); 公安部科技强警基础工作专项(2022JC20)
