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作者：李长水;耿月华;姚萌;赵炳森;谢顺培;徐超;马庆周;张猛;
单位：河南农业大学植物保护学院菌物研究所;
摘要：【目的】深入探究麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)生长发育及致病力的分子作用机制,并鉴定BsTup1的互作蛋白。【方法】利用麦根腐平脐蠕孢(B. sorokiniana)孢子和不同时期的菌丝体为材料,构建酵母双杂交cDNA文库,以BsTup1基因为诱饵来筛选酵母双杂交文库,确定与BsTup1相互作用的蛋白。【结果】1)利用SMART(switching mechanism at 5′end of the RNA transcript)技术首次成功构建了麦根腐平脐蠕孢(B. sorokiniana)分生孢子和菌丝体的混合cDNA文库。文库鉴定结果表明,构建的cDNA文库库容为4.8×10~7 cfu·mL~(-1),文库插入片段重组率达100%且平均大小为1 000 bp。2)构建了pGBKT7-BsTup1诱饵载体,无自激活活性。3)使用诱饵蛋白载体pGBKT7-BsTup1对麦根腐平脐蠕孢(B. sorokiniana)酵母双杂交cDNA文库进行筛选,经测序、序列比对和酵母回转验证,获得38个与BsTup1相互作用的候选蛋白。【结论】成功构建了麦根腐平脐蠕孢(B. sorokiniana)的cDNA文库,并鉴定出38个与BsTup1相互作用的候选蛋白。
关键词：麦根腐平脐蠕孢;;SMART技术;;cDNA文库;;酵母双杂;;BsTup1
基金资助：中国博士后基金第74批面上资助项目(2023M741063);; 河南省科技攻关项目(232102110073);; 河南省高校科技创新团队支持计划项目(18IRTSTHN021);; 河南农业大学高层次人才专项支持基金项目(30501502);河南农业大学作物学科合作交叉优中选优项目(CCSR2022-3)
