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作者：范佳铭;龙丽瑾;刘文韬;翟康乐;宫雅楠;胡源;孟凡亮;魏销玥;郭亚慧;赵雅坤;王婉婷;张建中;闫笑梅;
单位：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室;中国医科大学;北京大学第三医院消化科;巴彦淖尔市疾病预防控制中心;
摘要：目的 本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库，用于传染病诊断用抗体筛选。方法 选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡，每个品种各5只，共30只。从法氏囊中提取总RNA，通过反转录合成cDNA。利用聚合酶链式反应技术扩增全套编码抗体可变区的基因序列。通过重叠延伸反应，将重链可变区和轻链可变区基因连接成为单链抗体。将经过回收并酶切纯化的单链抗体克隆到噬菌体载体上，电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞。结果 成功构建库容量达10~(10)的鸡源天然单链抗体库细胞库，噬菌体展示库滴度达10~(12)菌落形成单位/mL以上。随机挑选165个单克隆进行菌落PCR鉴定，转化阳性插入率为96.97%(160/165)；随机选取72株阳性克隆进行测序，抗体互补决定区3碱基序列及长度存在显著差异，表明构建的抗体库多样性良好。结论 本研究成功构建了大容量鸡源天然单链抗体库，为后续从中筛选出具有应用价值的特异性单链抗体奠定了基础。
关键词：鸡源;;天然抗体库;;单链抗体;;噬菌体展示技术
基金资助：首都卫生发展科研专项(No.2024-2G-4363);; 国家自然科学基金面上项目(No.81873959);; 财政专项基金(No.102393230020020000002;No.102393220020020000031)~~
