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作者：张花瑞;尹思英;张仁泽;潘国庆;包佳玲;周泽扬;
单位：西南大学资源昆虫高效养殖与利用全国重点实验室;西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室;重庆师范大学生命科学学院;
摘要：规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated systems, CRISPR/Cas)系统具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点，近年来在基因编辑领域得到广泛应用。采用显微注射技术，将LbCas12a转基因载体注入家蚕品系N4的胚胎中，通过绿色荧光筛选标记筛选出阳性转基因家蚕。随后，提取转基因蚕蛾的基因组DNA、总RNA及总蛋白，基因组PCR检测确定LbCas12a基因成功插入转基因家蚕的基因组中，且定位于转基因家蚕13号染色体上。通过定量PCR检测及Western blot分析，确定LbCas12a基因在转基因家蚕中成功表达。对转基因家蚕进行经济性状评价，证实LbCas12a转基因家蚕的蚕茧及蚕蛹与正常N4品系家蚕无显著差异。综上所述，LbCas12a转基因家蚕的构建为CRISPR/Cas12a基因编辑技术在家蚕中的应用奠定了基础。
关键词：CRISPR/Cas12a;;基因编辑;;转基因家蚕;;经济性状评价
基金资助：重庆市留学回国人员创新支持计划项目(cx2018087);; 中央高校基础研究基金项目(XDJK2020B005);; 重庆市院士牵头科技创新引导项目(cstc2018jcyj-yszxX0012)
