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作者：赵楠楠;李彦杰;秦合伟;朱博超;丁慧敏;刘娟;马璐瑶;牛丽;
单位：河南中医药大学康复医学院;河南省中医院(河南中医药大学第二附属医院)康复科;郑州卫生健康职业学院;
摘要：目的:基于网络药理学方法及实验研究，探讨通脉开窍丸治疗血管性痴呆(vascular dementia, VD)的分子作用机制。方法:通过网络药理学分析获得通脉开窍丸治疗VD的可能靶点和信号通路。将72只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、通脉开窍丸6.9、13.8、27.6 g/kg组、盐酸多奈哌齐0.45 mg/kg组。采用改良2-VO造模方法构建VD大鼠模型；水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力变化；HE和尼氏染色观察大鼠海马神经元病理形态及数量变化；透射电镜观察海马神经元超微结构；免疫组化法(IHC)和Western blot法检测大鼠海马组织中核心靶点与通路的表达。结果:发现通脉开窍丸有效活性成分有121个，潜在靶点124个。VD的靶点有2 506个，两者交集靶点为76个；关键靶点为半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)、上皮生长因子(EGFR)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、缺氧诱导因子1α(HIF1A)等；GO功能富集分析生物过程得到338个条目，主要有正向调控、细胞凋亡过程的负向调节、对脂多糖的应答等；分子功能得到64个条目，主要富集在转录因子活性；细胞组分得到86个条目，主要集中在半胱天冬酶复合物、大分子复合体、染色质、突触等；KEGG通路富集分析主要涉及通路有脂质和动脉粥样硬化、癌症通路、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶(AKT)信号通路、TNF信号通路、AGE-RAGE信号通路等。动物实验结果显示，与模型对照组相比，通脉开窍丸6.9、13.8、27.6 g/kg组及盐酸多奈哌齐0.45 mg/kg组能有效改善VD大鼠学习记忆能力(P<0.01),海马神经元形态较明显恢复，数量有所增加，线粒体结构和功能好转，大鼠海马组织中CASP3蛋白阳性表达显著下调(P<0.01),PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达明显上调(P<0.05或P<0.01),在一定范围内，通脉开窍丸治疗效果呈现剂量依赖性。结论:本研究初步揭示通脉开窍丸的活性成分与VD的关键蛋白之间存在一定关系，通过多靶点、多通路的综合调控网络发挥治疗VD的作用，其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路以及抑制细胞凋亡有关。
关键词：通脉开窍丸;;网络药理学;;血管性痴呆;;细胞凋亡;;磷脂酰肌醇-3激酶;;蛋白激酶
基金资助：中原英才计划中原青年拔尖人才项目(豫组通[2021]44号);; 张仲景传承与创新专项”专项课题(编号：GZY-KJS-2022-043-3);; 河南省中医药拔尖人才培养项目专项课题(编号：2022ZYBJ15);; 河南中医药大学研究生科研创新项目(编号：2022KYCX075);河南中医药大学研究生科研创新项目(编号：2022KYCX074)
