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作者：王双;包逸雯;胡祖权;王赟;刘鲜梅;曾柱;
单位：贵州医科大学基础医学院,贵州省微生物与传染病防控重点实验室,贵州省感染免疫与抗体工程重点实验室;贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院),贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室;贵州医科大学附属医院介入科;
摘要：本研究旨在探讨吡非尼酮(pirfenidone, PFD)能否通过降低乳腺癌细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的沉积，从而改善其免疫微环境。本研究构建了4T1乳腺癌模型，并随机将其分为模型对照组(PBS灌胃处理)和PFD治疗组(PFD灌胃治疗)。采用马松染色和天狼星红染色检测肿瘤纤维化程度，用原子力显微镜检测肿瘤组织硬度，用免疫荧光染色检测肿瘤组织中CD8~+T细胞的浸润以及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和胶原蛋白的表达情况。在转化生长因子-β (transforming growth factor-β, TGF-β)将成纤维细胞诱导为癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)的过程中，同时加入PFD处理细胞48 h,用实时定量PCR (real-time quantitative PCR, RT-qPCR)检测CAFs经典标志物α-肌动蛋白-2(actin alpha 2,ACTA2)、成纤维细胞特异性蛋白(fibroblast specific protein,FSP)、血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,THBS-1)的表达情况，同时采用免疫荧光检测成纤维细胞中α-SMA的表达情况。结果显示，在动物实验中，相较于模型对照组，PFD治疗组中的胶原纤维沉积显著减少，组织硬度降低，CD8~+T细胞浸润明显增加，α-SMA和胶原蛋白的表达也显著下降。在细胞实验中，PFD能明显抑制TGF-β刺激成纤维细胞的ACTA2、FSP和THBS-1基因表达水平的上升，降低细胞中α-SMA的表达。因此，PFD能抑制CAFs的活性，降低乳腺癌ECM的沉积及肿瘤组织的硬度，增加CD8~+ T细胞的浸润，改善乳腺癌的免疫微环境，表明PFD具有作为免疫治疗[如免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors, ICIs)]辅助用药的潜能。
关键词：吡非尼酮;;乳腺癌;;细胞外基质(ECM)沉积;;肿瘤相关成纤维细胞;;免疫细胞浸润
基金资助：国家自然科学基金项目(12132006);; 贵州省自然科学基金项目(黔科合平台人才[2016]5676);; 贵州省基础研究计划(自然科学类)项目(黔科合基础-ZK[2023]一般402)共同资助
