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作者：张铭芳;任佳慧;张亚慈;位雪丹;申艾娟;张昂克;段红;
单位：河南农业大学动物医学院;
摘要：【目的】制备非结构蛋白1α(non-structural protein 1α, NSP1α)多克隆抗体，为深入研究NSP1α蛋白功能提供物质基础，并为猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）防控靶点的选择提供新思路。【方法】以pCAGGS-NSP1α-HA质粒为模板，聚合酶链式反应扩增NSP1α基因，利用相关生物信息学在线软件分析PRRSV SD16毒株NSP1α基因和其他PRRSV毒株NSP1α基因序列同源性、蛋白的理化性质、氨基酸亲-疏水性、跨膜结构域、信号肽序列、磷酸化位点、二级和三级结构。通过EcoR I和Xho I酶切位点将NSP1α克隆至pET-28a-His原核表达载体。测序正确的pET-28a-NSP1α-His质粒转化至大肠杆菌E. coli BL21(DE3)表达感受态细胞，将诱导表达、纯化复性后的NSP1α蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，Western blot和间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay, IFA）鉴定制备的多克隆抗体的反应原性，通过Western blot和激光共聚焦分析NSP1α蛋白亚细胞分布。【结果】信息学分析结果表明，SD16毒株NSP1α蛋白有501个氨基酸，为不稳定的疏水性蛋白，其序列与HLJ毒株序列同源性最高，与I型PRRSV序列同源性最低；NSP1α蛋白无信号肽序列，无跨膜结构域，存在13个磷酸化位点；二级结构主要包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲。将获得的高纯度并且有活性的NSP1α蛋白进行小鼠免疫，检测其血清抗体效价可达1∶64 000。Western blot和IFA结果显示，制备的多克隆抗体特异性识别PRRSV NSP1α蛋白。Western blot和激光共聚焦结果显示，NSP1α蛋白主要定位在细胞核内。【结论】成功表达、纯化了PRRSV NSP1α蛋白并制备了鼠源多克隆抗体，该多克隆抗体与PRRSV NSP1α蛋白具有良好的反应活性和特异性。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;;非结构蛋白1α;;原核表达;;多克隆抗体;;生物学特性
基金资助：国家自然科学基金项目（32302871）;; 河南省重点研发与推广专项（科技攻关）（232102110101）
