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作者：张慧辉;王可心;李艳伟;魏小兵;王磊;胡建和;丁轲;刘明成;夏小静;
单位：河南科技学院动物科技学院;
摘要：【目的】通过构建猪链球菌（Streptococcus suis,SS）2型（SS2）和9型（SS9）双重快速检测方法，为监测SS的流行和传播提供技术支持。【方法】分别以SS2特有荚膜多糖糖编码基因（capsular polysaccharide 2J gene, cps2J）和SS9特有荚膜多糖糖编码基因（capsular polysaccharide 9H gene, cps9H）为靶标设计引物和探针，对反应体系和反应条件进行优化，建立基础型重组酶聚合酶等温扩增（Basic-recombinase polymerase amplification, Basic-RPA）快速检测技术，并对其特异性、灵敏度、重复性和临床应用效果进行评价。【结果】构建的SS2/9双重Basic-RPA检测方法引物为CPS2J212和CPS9H304，引物体积V(CPS2J212/μL)∶V(CPS9H304/μL)为2.4∶1.8，反应温度为39℃，反应时间为20 min。特异性结果表明，该方法与其他常见病原体无交叉反应，特异性良好。灵敏度结果显示，该方法针对SS2/9检测限达到1×10~(-3) mg·L~(-1)，优于常规PCR的1×10~(-2) mg·L~(-1)。重复性结果显示，该方法有良好的稳定性。用该方法对41例临床样品进行检测，其检出率为24.4%，与单重Basic-RPA方法检测结果一致，高于细菌分离方法的检出率12.2%，以及常规PCR方法的检出率19.5%。【结论】构建的SS2/9的双重Basic-RPA检测方法，特异性和稳定性好，灵敏度高，可应用于SS快速诊断和血清分型。
关键词：猪链球菌;;基础型重组酶聚合酶等温扩增;;荚膜多糖;;血清分型;;双重检测
基金资助：河南省高校科技创新人才项目（23HASTIT046）;; 河南省优秀青年科学基金项目（232300421031）;; 国家自然科学基金面上项目（32172876,32473070）
