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作者：张金熔;邹艳丽;王筱真;孙凡琪;余李龙;冯春燕;蒋珽;屈海龙;李金明;王志亮;杨振;
单位：南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/“一带一路”国际重大跨境动物疫病诊断与免疫专业科技创新院;中国动物卫生与流行病学中心,外来病监测与研究中心;中国检验检疫科学研究院;
摘要：旨在提高牛结节性皮肤病病毒(LSDV)毒株在细胞中的增殖水平。通过比对LSDV XJ201901毒株在不同细胞中的增殖情况，发现牛肾细胞(MDBK)是其敏感细胞系。为了进一步优化病毒增殖条件，利用CRISPR/Cas9技术构建了Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)敲除的MDBK细胞系，并通过实时荧光定量PCR(qPCR)、半数组织细胞感染量(TCID_(50))和Western blot试验对野生型与IFN-Ⅰ敲除MDBK细胞系中的病毒含量和蛋白表达量进行了评估。基因测序结果显示，IFN-Ⅰ敲除细胞系中存在碱基缺失导致的移码突变，证实基因敲除成功; q PCR、TCID_(50)和Western blot试验结果显示，IFN-Ⅰ敲除MDBK细胞系可以显著促进LSDV XJ201901毒株的复制。该研究为LSD疫苗的研发和病毒与细胞互作机制的探索奠定了基础。
关键词：CRISPR/Cas9;;Ⅰ型干扰素;;MDBK;;牛结节性皮肤病病毒
基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFD1800500)
