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作者：刘甜甜;李欣;刘增再;何瑜;张建超;陈志雄;范杰;王贵平;葛猛;李润成;
单位：湖南农业大学动物医学院;长沙市动植物疫病预防控制中心;浏阳市动物疫病预防控制中心;
摘要：为建立一种高效准确检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法，以Mhp P46基因为靶基因设计、合成特异性引物及探针，通过优化反应条件，建立了Mhp RT-q PCR检测方法，并应用于临床样品检测。结果:该方法的最佳引物和探针浓度分别为0.4μmol/L和0.2μmol/L，最适退火温度为60℃，Ct值与标准质粒拷贝数之间具有良好的线性关系，与其他猪常见病原体无交叉反应，检测最低拷贝数为1.0×10~1copies/μL，组内和组间变异系数均小于2%，建立的RT-q PCR方法特异性、敏感性与重复性均较好;利用建立的方法与商品化试剂盒对81份临床样品进行检测，显示敏感性优于商品化试剂盒;同时对湖南省某规模化猪场生长育肥猪进行跟踪监测，共采集350份口、鼻拭子样品，发现100～130日龄属于Mhp感染活跃阶段，且临床用药可减轻感染程度。综上，本试验建立的RT-q PCR方法可用于Mhp监测和流行情况调查，为Mhp感染的防控与净化提供技术支持。
关键词：猪肺炎支原体;;实时荧光定量PCR;;检测方法
基金资助：湖南省重点研发计划项目(2023NK2017);; 湖南省普通高等学校科技创新团队支持计划项目(2023)
