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作者：范昊宇;蒋蔚;汪萍;宫震;韩翔舒;白航飞;刘姝悦;李月;张立雪;付修龙;杜玮;阿依江·木合塔尔;平继辉;朱启运;蒋松;夏俊;
单位：石河子大学动物科技学院;新疆畜牧科学院兽医研究所(新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心);中国农业科学院上海兽医研究所;新疆动物疾病防控工程技术研究中心;新疆农业大学动物医学院;南京农业大学动物医学院;新疆畜牧科学院畜牧研究所;兰州大学动物医学与生物安全学院;
摘要：旨在制备牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)单克隆抗体(MAb),为BCoV疫苗制备和建立免疫胶体金等特异性检测方法奠定基础。使用原核表达系统制备重组BCoV N蛋白，BCoV灭活全病毒液免疫BALB/c小鼠；以N蛋白和全病毒为抗原，通过间接ELISA法检测抗体效价。经细胞融合与5轮亚克隆，筛选出分泌目标抗体的单克隆细胞株。采用腹水法制备单克隆抗体并纯化，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证抗体反应性与特异性。结果：筛选出3株针对BCoV N蛋白的杂交瘤细胞株(2D12C、3D6E、4D1F),分泌的单克隆抗体轻链均为Kappa链，2D12C与4D1F重链为IgG2a亚型，3D6E重链为IgG1亚型；IFA试验表明3株单克隆抗体均能与BCoV发生特异性结合；Western blot证明3株单克隆抗体与BCoV和重组表达BCoV N蛋白均反应良好，且3株单克隆抗体与感染牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒及牛副流感病毒3型的细胞均不发生特异性反应。综上，制备了3株特异性较高、生物学活性良好的BCoV单克隆抗体，为后续疫苗制备及检测方法研究奠定了基础。
关键词：牛冠状病毒;;N蛋白;;单克隆抗体;;间接ELSIA
基金资助：新疆维吾尔自治区重大科技专项(2023A02007);; 新疆维吾尔自治区天山英才青年科技拔尖人才项目(2022TSYCCX0046);; 新疆维吾尔自治区肉牛产业技术体系项目资助项目(XJARS-10);; 自治区西门塔尔(安格斯)牛群体改良体系经费资助项目(2025XM-14)
