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作者：吴敏;邵轶智;卢彤岩;赵景壮;徐黎明;
单位：天津农学院水产学院;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所;黑龙江省水生动物病害与免疫重点实验室;
摘要：为了建立传染性胰腺坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus, IPNV)快速诊断方法，通过对IPNV病毒VP2蛋白进行抗原表位预测，筛选出抗原性强、保守性好，且位于蛋白表面第178～191位和第380～393位的两个肽段，分别制备了针对VP2蛋白的单克隆抗体VP2-178抗体和VP2-380抗体；对纯化后的抗体进行HRP标记，建立了针对IPNV病毒VP2蛋白的抗原捕获ELISA检测方法。结果表明：捕获抗体为VP2-178抗体，其最佳工作浓度为0.5μg/孔；检测抗体为VP2-380抗体，最佳稀释度为1∶2 000;经检测条件优化后，该ELISA方法能够检测国内流行的1型和5型IPNV毒株，但与传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒及病毒性出血性败血症病毒均无反应，表明该方法广谱性好、特异性强；灵敏度试验结果显示，该方法对IPNV的最低检测限为62.5 TCID_(50)/mL;重复性结果显示，批内和批间重复性变异系数均小于7%;利用本研究建立的抗原捕获ELISA检测方法与国标方法同时对40份临床样品进行检测，结果显示两者符合率为100%。本研究建立的ELISA检测方法可为IPNV的临床快速诊断提供技术支持。
关键词：传染性胰腺坏死病毒;;抗原表位;;单克隆抗体;;抗原捕获ELISA
基金资助：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2023TD45);; 黑龙江省重点研发计划项目(JD24A013)
