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作者：李睿嘉;张倩倩;李静;王子轩;郭世龙;董雯;郭登洲;
单位：河北中医药大学研究生院;河北省中医院;河北医科大学第一医院;
摘要：目的 基于抑制沉默信息调节因子1(Sirt1)调控缺氧诱导因子1α(Hif-1α)/内质网应激（ERS）轴探讨当归芍药散治疗糖尿病肾脏疾病（DKD）的可能作用机制。方法 通过CCK8法检测小鼠肾小球内皮细胞（MRGEC）在不同浓度当归芍药散干预下的增殖率，筛选当归芍药散干预浓度进行后续实验。将MRGEC分为缺氧低糖对照组、缺氧高糖模型组、当归芍药散组、厄贝沙坦组、Sirt1抑制剂组、Sirt1抑制剂+当归芍药散组、ERS抑制剂组，按照分组分别予对应处理。观察细胞形态，采用流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞内活性氧（ROS）水平，全自动生化仪检测细胞中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）水平，Western Blot法检测细胞中Sirt1、Hif-1α、B细胞淋巴瘤2(BCL-2)、磷酸化的蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白（CHOP）、分化簇31(CD31)、低密度脂蛋白受体（VLDLr）蛋白水平，RT-qPCR法检测细胞中GRP78、ATF4、CHOP mRNA表达，免疫荧光法检测细胞中Hif-1α、GRP78、ATF4、CHOP的表达。结果 筛选出0.7 mg/ml浓度的当归芍药散进行后续实验。缺氧低糖对照组MRGEC呈梭形，排列规则且有序；缺氧高糖模型组MRGEC胞体缩小，细胞间隙增大，失去有序排列特征；Sirt1抑制剂组MRGEC杂乱分布，细胞间隙更大；当归芍药散组、厄贝沙坦组、Sirt1抑制剂+当归芍药散组、ERS抑制剂组上述特征均有所缓解。与缺氧低糖对照组比较，缺氧高糖模型组细胞凋亡率、细胞内ROS水平升高（P<0.05）；细胞中TG、TC水平升高，Sirt1、BCL-2、CD31蛋白水平降低，Hif-1α、p-PERK、VLDLr蛋白水平升高，GRP78、ATF4、CHOP蛋白及mRNA表达升高（P<0.05）。与缺氧高糖模型组比较，Sirt1抑制剂组上述指标更加严重，当归芍药散组、厄贝沙坦组、ERS抑制剂组上述指标有所改善（P<0.05）。与Sirt1抑制剂+当归芍药散组比较，当归芍药散组细胞上述指标有所改善（P<0.05）。与Sirt1抑制剂组比较，Sirt1抑制剂+当归芍药散组细胞上述指标有所改善（P<0.05）。结论 当归芍药散可以抑制缺氧高糖诱导的MRGEC凋亡，其可能通过靶向Sirt1调控Hif-1α/ERS，从而缓解MRGEC的脂毒性损伤，延缓DKD的进展。
关键词：糖尿病肾脏疾病;;肾小球内皮细胞;;当归芍药散;;糖脂代谢;;内质网应激;;缺氧
基金资助：河北省中医药管理局科研计划（2025285）;; 河北省研究生创新资助项目（XCXZZBS2025015）;; 河北省自然科学基金（H2022423367）
