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作者：储丽宇;薛希彤;苗云博;唐国瑞;文晓晓;王学富;赵海鹏;侯江;芮萍;杨姗姗;王丽丽;李封赛;马增军;宋涛;
单位：河北科技师范学院动物科技学院;秦皇岛野生动物园;
摘要：为获取猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）的特异性纳米抗体，本试验构建了表达FIPV重组三聚体刺突（RS）蛋白的真核质粒pCAGGS-FIPV-RS，利用人胚胎肾293悬浮细胞（HEK293F）表达并纯化FIPV RS蛋白；以纯化的FIPV RS蛋白作为包被抗原，利用噬菌体展示技术，从天然噬菌体展示文库中筛选出序列不同的纳米抗体基因；构建纳米抗体真核表达载体pCAGGS-VHH-Fc，利用人胚胎肾293贴壁细胞（HEK293T）进行试表达，通过蛋白免疫印记试验（Western blot）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选能正常表达且具有高亲和力的纳米抗体，利用HEK293F细胞表达并纯化高亲和力的纳米抗体，通过间接免疫荧光试验（IFA）鉴定纯化后的纳米抗体与RS蛋白的反应原性。结果显示，本试验成功表达并纯化了FIPV RS蛋白；经过3轮噬菌体淘选后随机挑取41个阳性单克隆菌落，经测序分析，共筛选出10株序列不同的纳米抗体；成功构建pCAGGS-VHH-Fc重组真核表达质粒。Western blot和间接ELISA结果显示，其中7株纳米抗体与FIPV RS蛋白具有较好的反应原性；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）证实了这7株纳米抗体在HEK293F细胞中成功大量表达和纯化；IFA结果显示，其中5株纳米抗体能够特异性结合FIPV RS蛋白。本试验可为FIPV的诊断、治疗和致病机理研究提供参考。
关键词：猫传染性腹膜炎病毒(FIPV);;重组三聚体刺突(RS)蛋白;;真核表达;;噬菌体展示技术;;纳米抗体
基金资助：现代农业产业技术体系河北省创新团队项目（HBCT2024220208）;; 河北省高等学校科学技术研究项目（BJK2023012）;; 秦皇岛科学技术局项目（202302B021）
