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作者：刘彪;龚雪;胡璧梁;郭春磊;钟根深;
单位：河南省免疫与靶向药物重点实验室,新乡医学院医学技术学院;湖南思为康医药有限公司;长沙学院生物与化学工程学院;
摘要：目的 探究ATP合酶抑制因子1(ATPIF1)对于嵌合抗原受体(CAR)-NK92细胞抗肿瘤活性的影响。方法 构建靶向HER2的ATPIF1过表达和敲低的CAR-NK92细胞；流式细胞术检查CAR阳性表达率；CCK-8法检测细胞增殖能力；Seahorse分析细胞糖酵解能力；线粒体膜电位探针(JC-1)法检测细胞线粒体膜电位水平；萤火虫荧光素酶报告基因检测法检测靶细胞裂解率；流式细胞术检测细胞CD107a、自然杀伤细胞组2成员D(NKG2D)、颗粒酶B(GzmB)、穿孔素(perforin)、白细胞介素2(IL-2)表达水平；实时荧光定量PCR检测细胞干扰素诱导蛋白与四肽重复1(IFIT1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 ATPIF1、己糖激酶1(HK1)表达；2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)抑制糖酵解，检测对CAR-NK92细胞抗肿瘤能力影响。结果 成功制备靶向HER2的对照组CAR-NK92细胞以及ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞；ATPIF1过表达的CAR-NK92细胞靶细胞裂解率、 NKG2D和CD107a的表达水平、 GzmB和IL-2分泌能力、 IFIT1和TNF-α的mRNA表达水平显著上调，ATPIF1敲低表达后结果相反。ATPIF1过表达引起CAR-NK92细胞代谢重编程，线粒体膜电位(Δψm)显著降低，HK1的mRNA表达水平显著上调，基础糖酵解和糖酵解能力增强。2-DG(5μmol/L)抑制糖酵解后，ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞与对照组相比，NKG2D和CD107a表达水平无显著差异。结论 ATPIF1通过调节糖酵解代谢能力来影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性，通过过表达ATPIF1可以增强CAR-NK92细胞的抗肿瘤活性。
关键词：CAR-NK;;NK92;;ATPIF1;;糖酵解;;肿瘤
基金资助：湖南省自然科学基金项目(2023JJ30091,2022JJ80081);; 国家自然科学基金-河南省联合基金项目(U1904131)
