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作者：袁越;李娇娇;耿嘉;陈虎;陈佳禾;金蕊;
单位：南京医科大学第一附属医院儿科;
摘要：目的 研究转录因子性别决定区Y框蛋白9 (SOX9)在肺纤维化(PF)中的表达及对PF相关基因小窝蛋白1 (Cav-1)表达水平的影响及分子机制研究。方法 在GEO数据库(GSE2052数据集)中，分析PF患者SOX9和Cav-1的表达水平及相关性。通过染色质免疫沉淀(ChIP)实验检测SOX9是否可以与Cav-1启动子结合。将Cav-1基因启动子片段(-1000～+60 nt)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中，得到pCav-1-1060,并应用数据库预测SOX9在此片段上的结合位点。通过双荧光素酶报告基因系统测定Cav-1基因启动子片段在人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞)中的活性。将pCav-1-1060与SOX9小干扰或过表达质粒共转染至MRC-5细胞后，再次利用双荧光素酶报告基因系统测定，以明确SOX9对Cav-1基因的调控。利用实时荧光定量PCR和Western blot法检测SOX9的敲低和过表达对Cav-1基因表达量的具体影响，明确SOX9对Cav-1基因表达水平的影响。结果 在PF患者中(GSE2052数据集), Cav-1表达水平降低，SOX9表达水平增高，且二者表达水平呈负相关。SOX9可以与Cav-1启动子结合。Cav-1基因启动子片段(-1000～+60 nt)在MRC-5细胞中有活性，并在此片段中存在与转录因子SOX9的结合位点。转录因子SOX9在启动子、 mRNA及蛋白水平对Cav-1存在负向调控。结论 转录因子SOX9在PF中表达增高，且对PF相关基因Cav-1启动子活性、 mRNA和蛋白表达水平存在负向转录调控作用。
关键词：性别决定区Y框蛋白9(SOX9);;小窝蛋白1(Cav-1);;启动子;;转录调控;;肺纤维化(PF)
基金资助：国家自然科学基金(82270068)
