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作者：沈星;侯诗源;刘梓谕;朱梦婷;赵帅;刘蓉蓉;吴兴安;
单位：空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室;
摘要：目的 构建稳定过表达汉滩病毒(HTNV)受体整合素β3(ITGB3)的细胞系，以克服HTNV在常规培养细胞中扩增效率低、滴度不足的问题。方法 通过构建ITGB3的过表达慢病毒载体，利用慢病毒包装系统产生病毒颗粒，感染Vero E6和A549细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞株。采用CCK-8法评估细胞增殖活性，通过实时定量PCR、 Western blot法及免疫荧光技术检测ITGB3的表达水平；接种HTNV后，进一步利用上述方法测定病毒RNA载量、核蛋白(NP)表达水平及病毒滴度变化。结果 ITGB3在Vero E6和A549细胞中实现高效稳定过表达，且对细胞活力无显著影响。HTNV感染后，ITGB3过表达组的病毒RNA复制水平和NP蛋白表达均显著上调，病毒滴度明显高于对照组。结论 成功构建ITGB3稳定过表达细胞系，可有效促进HTNV的复制与扩增，为HTNV的基础研究及抗病毒药物的开发提供了可靠的实验平台。
关键词：汉滩病毒;;A549细胞;;Vero E6细胞;;ITGB3;;基因过表达
基金资助：国家自然科学基金(82272330)
