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作者：甘玲;何呈燕;王珏;薛海波;
单位：滨州医学院附属医院内分泌科;山东第一医科大学附属滨州人民医院内分泌科;
摘要：目的 探讨叉头框蛋白O1(Foxo1)在实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)的发生和免疫损伤中的作用及相关机制。方法 动物体内实验中，将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组：正常对照组(NC组)、 pTg多点皮下注射诱导的模型组(EAT组)、 pTg多点皮下注射并给予AS1842856腹腔注射的处理组(EAT联合AS组)。第8周末收取甲状腺、血清和脾脏组织。体外实验中，分别使用(0、 30、 60)nmol/L的AS1842856干预被细胞因子极化的小鼠脾脏单个核细胞(SMC)24 h,收集细胞进行后续实验。HE染色评估小鼠甲状腺组织炎症程度；ELISA检测小鼠血清中甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、白细胞介素17A(IL-17A)滴度；流式细胞术检测SMC中辅助性T细胞17(Th17)比例；Western blot法检测Foxo1、磷酸化Foxo1(p-Foxo1)、转录因子维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)及细胞因子IL-17A的蛋白表达水平；实时定量PCR检测RORγt、 IL-17A的mRNA水平。结果 EAT组小鼠甲状腺出现滤泡结构破坏和淋巴细胞浸润；血清TgAb及IL-17A水平均显著升高；体内Foxo1总蛋白表达无明显改变，p-Foxo1蛋白显著增多，SMC中Th17细胞百分比、脾指数、 RORγt和IL-17A的蛋白水平及mRNA水平均明显升高，且均与Foxo1的磷酸化水平呈正相关。EAT联合AS组小鼠甲状腺破坏和淋巴细胞浸润程度加剧；血清TgAb和IL-17A水平、 SMC中Th17细胞百分比、脾指数、 RORγt和IL-17A的蛋白及mRNA水平均明显升高。另外，随着AS1842856浓度的增加，Th17细胞百分比、 RORγt和IL-17A的表达呈浓度依赖性升高。结论 EAT小鼠Foxo1磷酸化失活增多，功能性Foxo1下调，对Th17细胞抑制作用减弱，致使Th17细胞分化及IL-17A分泌增强，进而参与EAT疾病发生及甲状腺自身免疫损伤。
关键词：自身免疫性甲状腺炎(AIT);;Th17细胞;;Foxo1;;IL-17A;;EAT
基金资助：山东省自然科学基金面上项目(ZR2022MH175);; 山东省重点研发计划(2016GSF201021);; 山东省研究生教育创新计划(20038612);; 滨州医学院附属医院科研创新团队(202031);滨州医学院附属医院后备领军人才项目(JC2019-03)
