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作者：王卉卉;朱向玲;吴旭铭;张慧茹;周园园;王安琪;刘崇;涂佳杰;
单位：安徽医科大学临床药理研究所,抗炎免疫药物教育部重点实验室,抗炎免疫药物安徽协同创新中心;
摘要：目的 繁育T细胞条件性敲除Spi1基因的小鼠并对其进行鉴定，为进一步探索Spi1编码蛋白PU.1的作用提供研究基础。方法 将Lck-Cre小鼠与Spi1~(flox/flox)小鼠进行杂交繁育，通过聚合酶链式反应（PCR）和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型，筛选出基因型为Lck-Cre×Spi1~(flox/flox)的小鼠即为T细胞条件性敲除Spi1基因的纯合子小鼠。使用磁珠分选脾脏T淋巴细胞，并应用Westernblot、实时荧光定量PCR(qPCR)及流式细胞术检测PU.1在T细胞中的敲除效率。结果 Lck-Cre×Spi1~(flox/flox)小鼠基因稳定遗传。与Spi1~(flox/flox)小鼠相比，Lck-Cre×Spi1~(flox/flox)小鼠脾脏T细胞中的PU.1表达水平显著降低。结论该研究应用Cre/LoxP系统和CRISPR/Cas9技术成功构建了T细胞条件性敲除Spi1基因小鼠，为后续研究PU.1在T细胞相关疾病中的具体作用提供了可靠的动物模型。
关键词：Spi1;Cre/LoxP系统;CRISPR/Cas9技术;T细胞;PU.1;条件性敲除
基金资助：安徽省高校杰出青年科研项目(编号：2022AH020052)
