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作者：贺建波;孙倍成;
单位：南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科;安徽医科大学第一附属医院肝胆胰及移植外科;
摘要：目的 探究谷胱甘肽过氧化物酶2(GPX2)在肝内胆管癌(ICC)发生发展中的作用。方法 利用Omicshare网站分析GPX2在ICC中的表达水平，通过实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)、Western blot及免疫组化染色验证其在ICC中的表达水平。构建稳定敲低和过表达GPX2的HuCCT1细胞系并进行体外实验。通过平板克隆实验、细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、细胞划痕实验、Transwell实验、流式细胞术等探究GPX2对ICC细胞增殖、迁移、凋亡和上皮间充质转化(EMT)的影响。最后构建小鼠胆管癌模型，检测GPX2在小鼠胆管癌中的表达水平。结果 Omicshare网站分析结果显示GPX2在ICC中普遍上调(P<0.001)。Western blot、RT-qPCR和免疫组化实验显示，与癌旁组织相比，GPX2在ICC中表达升高(P<0.000 1)。平板克隆、CCK-8实验结果显示GPX2敲低后，细胞克隆形成率下降(P<0.01),增殖能力降低(P<0.001);GPX2过表达后，细胞克隆形成率升高(P<0.01),增殖能力增强(P<0.01)。细胞划痕、Transwell和Western blot实验结果显示GPX2敲低后，划痕愈合速度减慢、迁移能力降低、E-cadherin升高(P<0.01),N-cadherin(P<0.01)、Vimentin(P<0.05)降低；GPX2过表达后，划痕愈合速度增快、迁移能力增强、E-cadherin降低(P<0.05),N-cadherin(P<0.01)、Vimentin(P<0.001)升高；凋亡流式细胞术和Western blot实验结果显示GPX2敲低后，细胞凋亡率增多、Bcl-2降低(P<0.001),BAX升高(P<0.01);GPX2过表达后，细胞凋亡率降低(P<0.01),Bcl-2升高(P<0.000 1),BAX降低(P<0.001)。最后在小鼠胆管癌模型中观察到GPX2升高。结论 GPX2在人和小鼠的胆管癌组织中高表达，并可能增强胆管癌细胞的增殖和迁移能力，促进肿瘤细胞EMT,抑制肿瘤细胞凋亡。
关键词：肝内胆管癌;GPX2;增殖;凋亡;上皮间充质转化
基金资助：国家自然科学基金(编号：81930086、82120108012); 安徽省高校科研项目(编号：2022AH010070); 安徽省临床医学研究转化专项(编号：202204295107020008)
