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作者：王彦伟;岳亚男;张素玲;李欢欢;陈赵媛;刘月月;逄文强;田克恭;
单位：国家兽用药品工程技术研究中心;普莱柯生物工程股份有限公司;
摘要：C129R和E165R分别是非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组编码的一种Mn依赖的超氧化物歧化酶和尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶，2种酶均参与ASFV的复制过程。通过研究ASFV C129R蛋白与E165R蛋白的功能，以指导非洲猪瘟的诊断及免疫预防研究。对ASFV SY-18株的C129R和E165R基因序列进行密码子优化后，利用大肠杆菌进行表达，纯化后获得重组蛋白，通过Western blot鉴定其反应性，并对其胞外酶活力进行测定，对C129R蛋白的结构预测结果进行分析。结果：实现了C129R蛋白与E165R蛋白的可溶性表达，重组蛋白分子量分别约为15 kDa和18 kDa, Western blot显示C129R与E165R蛋白均能与ASFV阳性血清产生特异性反应；胞外酶活力测定显示，C129R与E165R蛋白在胞外均有酶学活性，比酶活力分别为(60.2±3.8) U/mg和(32.6±2.4) U/mg;蛋白质结构预测结果显示，C129R为双结构域蛋白，主要由N端α螺旋结构域和C末端α/β结构域组成，C129R蛋白N端α螺旋结构域和C末端α/β结构域的交界处可能是其主要活性位点，序列保守的β-折叠桶(K_(32)～A_(101))可能在其发挥功能时起重要作用。
关键词：非洲猪瘟病毒;C129R蛋白;E165R蛋白;可溶性表达;酶学活性;结构预测
基金资助：洛阳市重大科技专项(1901029A)
