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作者：张嘉祺;刘雯雯;王茜婷;陈夏欢;刘梅林;
单位：北京大学第一医院老年病内科;
摘要：目的 探讨甲基转移酶样3(METTL3)对人成巨核细胞白血病细胞(MEG-01)花生四烯酸(AA)代谢通路的影响和相关机制。方法 构建METTL3差异表达的MEG-01,分为正常对照(Blank)组、METTL3过表达(OE)组和过表达阴性对照(OE-NC)组、METTL3敲低(KD)组和敲低阴性对照(KD-NC)组。采用定量聚合酶链反应(q PCR)法和免疫印迹(Westernblot)法检测各组METTL3、YTH结构域家族蛋白(YTHDF1、YTHDF2)以及参与AA代谢的关键基因前列腺素内过氧化物合酶1/环氧合酶-1(PTGS1/COX-1)、前列腺素内过氧化物合酶2/环氧合酶-2(PTGS2/COX-2)、血栓素A合酶1(TBXAS1)、前列腺素I_2合酶(PTGIS)和前列腺素I_2受体(PTGIR)的表达量变化。采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定细胞培养上清中AA代谢产物前列腺素H_2(PGH_2)和血栓素B_2(TXB_2)的水平。采用蛋白稳定性实验和RNA结合蛋白质免疫沉淀(RIP)实验验证YTHDF1与COX-1m RNA的结合情况。结果 q PCR和Westernblot检测显示,OE组YTHDF1、PTGS1/COX-1的m RNA和蛋白水平较OE-NC组升高,KD组较KD-NC组降低(均为P<0.05)。ELISA测定显示,细胞培养上清中OE组PGH_2、TXB_2的含量高于OE-NC组,KD组TXB_2的含量低于KD-NC组(均为P<0.05)。蛋白稳定性实验和RIP实验证实,METTL3通过YTHDF1参与COX-1m RNA的翻译调控。结论 METTL3可能通过促进N6-甲基腺苷(m6A)修饰介导的COX-1mRNA翻译效率,调控巨核细胞系的AA代谢通路。
关键词：甲基转移酶样3;;N6-甲基腺苷甲基化;;MEG-01细胞;;花生四烯酸;;心血管疾病
基金资助：北大百度基金资助项目(2019BD019);; 北京大学第一医院高质量临床研究专项(2023HQ04)~~
