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作者：陈志萍;陈益;吴梦;邓晓雨;高雅晴;葛良鹏;杜华茂;
单位：西南大学蚕桑纺织与生物质科学学院;重庆金迈博生物科技有限公司;
摘要：目的 建立猪链球菌溶血素（SLY）的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，通过对SLY进行定量检测来评价猪链球菌产生SLY的能力与致病力。方法 用4种胆固醇依赖性溶细胞毒素的类毒素免疫BALB/c鼠、新西兰大白兔制备高免血清，以间接ELISA方法检测高免血清与重组猪溶素（rSLY）、重组肺溶血素（rPLY）、重组李斯特菌溶血素O(rLLO)和重组产气荚膜梭菌溶血素O(rPFO)的反应性。以全人单克隆抗体1-10F（专利号CN 113957057B）为捕获抗体、高免血清为检测抗体，经正交试验优化两类抗体的工作浓度，建立双抗体夹心ELISA方法，并对猪链球菌、肺炎球菌、单增李斯特菌、产气荚膜梭菌、溶血性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的培养液进行特异性试验。结果 间接ELISA方法显示，兔抗rSLYP353L血清与rPLY有交叉反应，鼠抗rPLY血清与rSLY、rLLO有交叉反应，四联血清与rPLY、rSLY、rLLO有较强反应，rPFO与3种血清的反应性较弱。经优化，双抗体夹心ELISA方法的捕获抗体包被量为100 ng，检测抗体为鼠抗rPLY血清（1∶1 000），在此条件下，检测25～800ng/mL的rSLY呈线性关系，R~2=0.986；对猪链球菌培养液为强阳性反应，对肺炎球菌培养液为弱阳性反应，其他为阴性反应。结论 本研究建立的双抗体夹心ELISA方法能定量检测SLY，将为诊断高致病性猪链球菌感染提供新手段。
关键词：胆固醇依赖性溶细胞素;;猪链球菌;;肺炎球菌;;双抗体夹心酶联免疫吸附法
