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作者：陈晓洁;师小潇;张承凤;黎明;师伟伟;杨延丽;贺笋;
单位：天康制药股份有限公司;
摘要：本试验旨在建立高效液相体积排阻色谱（HPSEC）法进行重组猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD的定量质控并评价其应用，进一步扩展该方法在兽用疫苗领域的应用范围。制备并鉴定gD蛋白标准品，检测其在保存过程中的稳定性；采用HPSEC法定量检测gD蛋白并鉴定其色谱峰；建立HPSEC法检测gD蛋白标准品的标准曲线，并进行线性、检测限、准确度和精密度验证；考察HPSEC法定量检测细胞培养料液样品、纯化样品和乳化样品中gD蛋白浓度的适用性；对比HPSEC法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法定量gD蛋白结果的相关性。结果显示，制备的gD蛋白标准品纯度> 98%，可稳定存放12个月，浓度偏差为0.01%～2.80%。HPSEC法具有良好的线性（R~2=0.999 9,n=8）；检测限在5.0μg/mL以下；准确度较高，5个浓度的gD蛋白标准品检测准确度为93.2%～104.6%(n=6)；精密度良好，5个浓度的gD蛋白标准品6次重复检测的相对标准偏差（RSD）为0.2%～1.6%(n=6)；日间精密度良好，3批次细胞培养料液样品3 d各6次重复检测的RSD为1.1%～2.0%(n=6)；可应用于细胞培养过程中gD蛋白在细胞培养料液样品中表达量的监测，纯化样品和乳化样品中gD蛋白的检测。分别采用HPSEC法和SDS-PAGE法定量12批细胞培养料液样品中gD蛋白浓度，2种方法结果高度正相关（Rs~2=0.929 8,n=12），配对t检验无显著性差异（Ps=0.145 7）。结果表明，HPSEC法定量检测猪伪狂犬病毒gD蛋白适用性好、重复性好、准确度高，能应用于抗原生产不同阶段样品的质量控制，指导疫苗工艺开发。
关键词：高效液相体积排阻色谱(HPSEC);;猪伪狂犬病毒(PRV);;gD蛋白;;疫苗;;定量
基金资助：新疆维吾尔族自治区“天池英才”青年博士项目
