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作者：裴宗飞;于凯蓝;安欣娜;陈俊雯;张永宁;
单位：中国农业大学动物医学院;山东省农业生态与资源保护总站(山东省绿色食品发展中心);
摘要：为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA），本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2，通过间接免疫荧光试验（IFA）验证VP2的免疫反应性，并使用氨基三乙酸镍（NiNTA）树脂亲和纯化重组VP2蛋白。以纯化的VP2蛋白为包被抗原，利用棋盘滴定法确定最优的抗原包被浓度和待检血清稀释度，通过优化反应条件和确定临界值，建立了检测SVA抗体的间接ELISA检测方法，并评估了其特异性、敏感性、重复性及与IFA的检测符合率。结果显示，重组VP2蛋白在杆状病毒感染的Sf9细胞内呈现可溶性表达，能够被SVA VP2特异性单克隆抗体2F5识别；经Ni-NTA纯化后，获得了分子量约31 kDa的重组VP2蛋白；间接ELISA的最佳抗原包被浓度为2μg/mL，最佳血清稀释度为1∶100，最佳酶标二抗稀释度为1∶10 000；阴阳性临界值为0.287；与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型抗血清无交叉反应；批内与批间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA检测了实验室保存的52份猪血清样本，与IFA的检测符合率为96.15%(50/52)。综上，本试验间接ELISA的成功建立为SVA抗体检测和流行病学调查提供了有力工具。
关键词：塞内卡病毒A(SVA);;VP2蛋白;;昆虫杆状病毒表达系统;;间接ELISA;;抗体
基金资助：国家自然科学基金项目（32072840）
