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作者：李玉林;周方方;闫生辉;于巧玲;王继创;石盼盼;王云龙;
单位：河南省生物工程技术研究中心;郑州职业技术学院生命健康学院;河南科技学院动物科技学院;
摘要：为了探究两种分子内佐剂促吞噬肽Tuftsin和破伤风毒素肽TT联合作用对非洲猪瘟病毒（ASFV）重组蛋白P753体液和细胞免疫的影响，本试验采用生物信息学软件确定了ASFV结构蛋白P72、P54和P30的优势表位并构建重组载体pET-28a(+)-p753和pET-28a(+)-p753-Tuftsin-TT，利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白，经纯化和透析复性后采用蛋白质印迹法（Western blot）和斑点酶联免疫吸附测定（Dot-ELISA）鉴定重组蛋白的免疫原性和免疫反应性。将2种重组蛋白与兽用商品化疫苗佐剂ISA 61 VG混匀后免疫小鼠，通过检测小鼠血清抗体水平、脾脏淋巴细胞增殖情况和细胞因子（IL-2、IL-4和IFN-γ）分泌水平来评价2种重组蛋白诱导的体液和细胞免疫效果。结果显示，2种重组蛋白在37℃、0.5 mmol/L IPTG条件下诱导表达4 h时以包涵体形式表达且表达量最高，经纯化复性后均具有免疫原性和免疫反应性。免疫小鼠后，P753组和P753-Tuftsin-TT组抗体水平均在首免42 d进入平台期，抗体水平均高于PBS组，其中，P753-Tuftsin-TT组抗体水平最高，抗原刺激指数和细胞因子（IL-2、IL-4和IFN-γ）含量极显著高于P753组（P <0.000 1）。结果表明，分子内佐剂Tuftsin和TT联合使用可显著提升P753重组抗原引起的体液和细胞免疫应答能力，为ASFV亚单位疫苗佐剂的研发提供参考。
关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV);;分子内佐剂;;亚单位疫苗;;体液免疫;;细胞免疫
基金资助：河南省重点研发与推广专项（222102110159）
