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作者：仇槿昕;侯辉;孙法壮;冯耀宇;李维克;
单位：华南农业大学兽医学院;山东省威海市文登区界石畜牧兽医工作站;山东省动物卫生技术中心;中国农业科学院兰州兽医研究所,动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;农业农村部动物病原生物学重点实验室,农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(西部);
摘要：施马伦贝格病毒（Schmallenberg virus,SBV）是一种新型正布尼亚病毒，主要感染牛、绵羊和山羊等反刍动物。SBV的核衣壳蛋白（N）已被证明是血清学检测的理想靶抗原。本研究将SBV N基因的全长编码序列克隆至pET-28a（+）载体，构建重组质粒pET-28a-SBV-N，转化至Rosseta感受态细胞中，IPTG诱导表达N蛋白。采用Ni-NTA琼脂糖亲和层析法纯化His-SBV-N蛋白，以获得的N蛋白免疫BALB/c小鼠，3次免疫后取效价高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，制备得到针对SBV N蛋白的单克隆抗体（McAbs），并通过间接ELISA筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。最终获得3株稳定分泌抗N单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2B1、2B2和3F2。抗体亚型鉴定均为IgG2a。Western blot和ELISA检测结果表明，这3株单抗在酶联免疫吸附试验中与重组SBV N蛋白具有良好的反应性，重组N蛋白的表达和单抗的成功制备为SBV的血清学诊断提供了重要材料。
关键词：施马伦贝格病毒;;核衣壳蛋白;;原核表达;;细胞融合;;单克隆抗体
基金资助：甘肃省科技重大专项（22ZD6NA001）
