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作者：万苗苗;阳倩;陈吉璐;陈丹丹;毛林;班谦;陈胜;惠文巧;
单位：安徽大学生命科学学院,干细胞及转化医学研究中心;安徽省农业科学院畜牧兽医研究所,畜禽产品安全工程安徽省重点实验室;
摘要：细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶，与许多癌细胞的生长有关。然而，目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统，首先设计CDK2基因的sgRNA片段，在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后，构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA，连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，对转化子进行验证，最后转染HEK293T细胞，检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明，CDK2基因敲除载体构建正确；荧光显微镜检测显示，细胞转染效率在75%以上；细胞增殖检测表明，山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体，可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系，研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。
关键词：CRISPR/Cas9;;山羊;;CDK2;;基因敲除
基金资助：国家自然科学基金项目（31402048）;; 安徽省重点研究和开发计划（202104e11020003）;; 安徽省自然科学基金项目（2208085MC74）;; 安徽省农业科学院重点实验室项目（2023YL016）;; 安徽省肉羊良种联合攻关项目（340000211260001000431）
