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作者：韩頔;张鑫;姚均;刘浩东;赵志艳;韩博学;金聪;
单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病溯源与智能决策全国重点实验室;河北医科大学公共卫生学院,河北省环境与人群健康重点实验室;
摘要：目的 基于HIV-1慢病毒载体（LV）系统制备一种新型HIV-1基因型耐药检测质控品，并对其均一性和稳定性进行评价。方法 采用改良的四质粒LV系统包装含有耐药突变K103 N的HIV-1假病毒（PsV）。通过RTPCR和测序方法鉴定携带耐药突变K103 N的HIV-1 PsV包装成功。使用HIV-1阴性血浆作为基质稀释HIV-1 PsV上清液制备HIV-1 PsV耐药检测质控品，并使用反转录数字PCR(RT-dPCR)和耐药位点检测方法对质控品的均一性和稳定性进行评价。结果 RT-PCR可扩增出PsV颗粒中插入的含有耐药突变K103 N的pol区基因序列（2648 bp），对扩增产物的测序结果与预期结果一致。从PsV制备的质控品中随机抽取10份使用RT-dPCR检测VL，结果差异无统计学意义（P>0.05）；并且使用耐药检测方法均可检出耐药突变K103 N，表明质控品具有良好的均一性。质控品分别在25℃、4℃、-20℃下保存28 d或反复冻融5次，RT-dPCR检测的VL无显著性下降，并且耐药检测均可检出耐药突变K103 N，表明质控品具有良好稳定性。结论 基于改良的四质粒LV系统制备的新型HIV-1 PsV耐药质控品具有良好的均一性和稳定性，可以实现对HIV-1基因型耐药检测全过程的质量控制。
关键词：艾滋病病毒;;慢病毒载体;;假病毒;;耐药检测质控品;;反转录数字聚合酶链式反应
基金资助：国家重点研发计划项目（2022YFC2305202）;; 北京市自然科学基金-昌平创新联合基金项目（L244069）;; 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室项目~~
