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作者：刘丽军;杜杰;刘欢;王渊;张静;
单位：咸宁市中心医院(湖北科技学院附属第一医院)神经内科;咸宁市第一人民医院神经内科;
摘要：目的 探讨lncRNA-BC200(BC200)靶向调控β位APP裂解酶1(BACE1)泛素化调节神经细胞损伤修复的作用机制。方法 小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为4组：对照组、氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)组、 OGD/R联合si-NC组、 OGD/R联合si-BC200组。为了进一步探索BC200和BACE1之间的关系，HT22细胞分为4组：OGD/R组、 OGD/R联合si-BC200组、 OGD/R和si-BC200联合NC组、 OGD/R和si-BC200联合BACE1组。20只雄性C57BL/6J小鼠随机分配到以下4组：对照组、大脑中动脉闭塞(MCAO)组、 MCAO联合si-BC200组、 MCAO和si-BC200联合BACE1组。通过实时定量PCR检测细胞中BC200、 BACE1的mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、BACE1蛋白表达，末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)试验检测凋亡细胞。结果 与对照组相比，OGD/R组HT22细胞活力显著降低，凋亡细胞百分比显著增加；与OGD/R联合si-NC组相比，OGD/R联合si-BC200组HT22细胞活力显著增加，凋亡细胞百分比显著降低。与对照组相比，OGD/R组HT22细胞中BACE1蛋白表达显著增强；与OGD/R联合si-NC组相比，OGD/R联合si-BC200组HT22细胞中BACE1蛋白表达显著降低。观察到在OGD/R处理后，BACE1的泛素化水平显著降低，BACE1蛋白表达显著增加。在用si-BC200转染后，BACE1蛋白的泛素化水平显著增加，而BACE1蛋白表达显著降低。与OGD/R和si-BC200联合NC组相比，OGD/R和si-BC200联合BACE1组HT22细胞中凋亡细胞百分比、 c-caspase-3、 BAX蛋白表达显著增加，Bcl2蛋白表达显著降低。与对照组相比，MCAO组小鼠脑梗塞区域、 TUNEL阳性细胞数显著增加，神经元存活数显著降低。与MCAO组相比，MCAO联合si-BC200组小鼠脑梗塞区域、 TUNEL阳性细胞数显著降低，神经元存活数显著增加，而BACE1的加入逆转了si-BC200的改善作用。结论 BC200与BACE1结合可抑制BACE1的泛素化，并参与介导OGD/R诱导的BACE1表达增强。特异性阻断BC200/BACE1轴可能成为保护脑缺血/再灌注诱导神经元凋亡的潜在治疗靶点。
关键词：lncRNA-BC200;;β位APP裂解酶1(BACE1);;泛素化;;小鼠;;神经元细胞;;凋亡
基金资助：湖北省卫生健康委员会科研项目(20220175)
