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作者：杨佳琪;张正皓;马芳;夏童童;刘虹麟;熊建团;马胜超;姜怡邓;郝银菊;
单位：国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室;宁夏回族自治区人民医院耳鼻喉科;宁夏医科大学基础医学院病理生理学系;宁夏医科大学检验学院;
摘要：目的 探究胞葬作用相关长链非编码RNA(EFRL)在同型半胱氨酸(Hcy)致动脉粥样硬化(AS)巨噬细胞胞葬作用中的影响及其作用机制。方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞，设立对照组(0μmol/L Hcy)和Hcy干预组(100μmol/L Hcy), Hcy干预的巨噬细胞转染锁核苷酸(GapmeR)后设置EFRL敲低阴性对照组(Hcy联合LNA-NC)和EFRL敲低组(Hcy联合LNA-EFRL);高通量测序获得差异性表达LncRNA MSTRG.88917.16(EFRL),基因组浏览器(UCSC)分析保守性，转录本蛋白编码潜能预测工具(CPC)和转录本蛋白编码能力预测软件(CPAT)分析编码蛋白能力，基因本体数据库(GO)和基因组破译方面的数据库(KEGG)分析相关生物学功能；核质分离法和RNA-FISH检测EFRL在巨噬细胞中定位；实时定量PCR检测Hcy干预的巨噬细胞中EFRL及靶基因遗传性痉挛性截瘫4型基因(SPAST)的表达水平；流式细胞术检测紫外线诱导的Jurkat细胞凋亡率；免疫荧光技术结合体外巨噬细胞胞葬实验分析巨噬细胞胞葬作用；ELISA检测炎症相关因子白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-18含量。结果 鉴定新的LncRNA MSTRG.88917.16并命名为EFRL(Efferocytosis Relatived LncRNA,胞葬作用相关长链非编码RNA); UCSC、 CPC、 CPAT明确EFRL保守性高且不具备编码蛋白能力，GO、 KEGG功能富集分析显示EFRL可能参与巨噬细胞胞葬作用；核质分离法和RNA-FISH检测EFRL定位于巨噬细胞细胞核；与对照组相比，Hcy组中EFRL及靶基因SPAST表达水平增高；与对照组(0 min)相比较，实验组(15、 30 min)凋亡率Annexin V>85%;与Hcy联合LNA-NC组相比，Hcy联合LNA-EFRL组中巨噬细胞胞葬作用增强，介导的炎症因子含量降低；与Hcy联合LNA-NC组相比，Hcy联合LNA-EFRL组中SPAST表达水平降低。结论降低EFRL的表达能够缓解Hcy抑制巨噬细胞胞葬作用的过程，其机制与EFRL调控下游靶基因SPAST有关。
关键词：胞葬作用;;同型半胱氨酸(Hcy);;动脉粥样硬化(AS);;长链非编码RNA
基金资助：国家自然科学基金面上项目(82370293,82270492);国家自然科学基金地区项目(82060139);; 国家自然科学基金区域创新发展联合基金(U21A20343);; 宁夏回族自治区重点研发计划重点项目(2023BEG02074,2022BFH02013,2021BEG02033)
