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作者：王坤;方昊翔;曹晓梅;
单位：安徽中医药大学徽学研究中心;安徽中医药大学中医学院;
摘要：目的 观察N~6甲基腺嘌呤(m~6A)甲基化调控缺刻基因1(Notch1)通路对哮喘骨髓间充质干细胞(BMSC)归巢的影响，以及中药复方阳和平喘颗粒干预研究。方法 采用大鼠BMSC和支气管上皮细胞共培养的方式。将提取的细胞分为支气管上皮细胞组、哮喘支气管上皮细胞联合间充质干细胞共培养组(以下简称共培养组)、共培养细胞联合正常血清组、共培养细胞联合最佳含药血清组、 siRNA-FTO联合正常血清组、 siRNA-FTO-NC联合正常血清组、 siRNA-FTO联合最佳含药血清组。检测共培养细胞活力和细胞周期变化；免疫荧光染色法检测BMSC归巢水平和归巢标志物；实时定量PCR检测Notch1通路相关基因的表达；Western blot法检测Notch1通路相关蛋白的表达。结果 与支气管上皮细胞组比较，共培养细胞组BMSC归巢水平和趋化因子受体4(CXCR4)、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)、Notch1、重组信号结合蛋白J(RBP-J)、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达升高。与共培养细胞组、共培养细胞联合正常血清组比较，共培养细胞联合最佳含药血清组BMSC归巢水平及CXCR4、 SDF-1表达升高，Notch1、 Hes1蛋白mRNA表达降低。与siRNA-FTO-NC联合正常血清组比较，siRNA-FTO联合正常血清组Notch1、 Activated Notch1、 RBP-J、 Hes1蛋白表达和细胞活力升高，BMSC归巢水平降低。与siRNA-FTO联合正常血清组比较，siRNA-FTO联合最佳含药血清组Notch1、 RBP-J mRNA, Activated Notch1、 Hes1蛋白表达降低，BMSC归巢水平升高，共培养细胞联合最佳含药血清组Notch1、 RBP-J、 Hes1 mRNA表达降低。与siRNA-FTO联合最佳含药血清组比较，共培养细胞联合最佳含药血清组细胞活力及Notch1、 Activated Notch1、 RBP-J、 Hes1蛋白降低，BMSC归巢水平升高。结论 阳和平喘颗粒可能通过上调FTO表达，抑制下游Notch1信号通路表达，从而促进哮喘BMSC归巢，减轻哮喘炎症。
关键词：骨髓间充质干细胞(BMSC);;支气管哮喘;;N~6甲基腺嘌呤(m~6A);;Notch1信号通路
基金资助：国家自然科学基金(82205053);; 安徽省高等学校自然科学研究项目(2022AH050531);; 安徽中医药大学第一批人才支持计划项目(2022rcyb015);; 中共安徽省委教育工委、安徽省教育厅优秀青年教师培育一般项目(YQYB2024026)
