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作者：刘艳艳;孙颖川;
单位：许昌学院医学院;许昌市中心医院肿瘤内科;
摘要：目的 探究肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样因子2(TIPE2)对肺癌肿瘤相关巨噬细胞(TAM)表型的调节作用，及其对肺癌细胞干性特征的影响。方法 培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，采用LV-TIPE2慢病毒或阴性对照LV-NC慢病毒感染RAW264.7细胞，实时荧光定量PCR和Western blot法检测感染后细胞中TIPE2表达，验证转染效率。将感染的RAW264.7细胞与肺癌细胞系A549细胞进行共培养，分为对照组(RAW264.7细胞或A549细胞单独培养)、 TAM组(RAW264.7细胞与A549细胞共培养)、 LV-NC组(感染LV-NC的RAW264.7细胞与A549细胞共培养)、 LV-TIPE2组(感染LV-TIPE2的RAW264.7细胞与A549细胞共培养),收集共培养后的RAW264.7细胞，细胞免疫荧光染色检测M2型巨噬细胞标志物甘露糖受体(CD206)蛋白表达，流式细胞术检测M1型、 M2型巨噬细胞比例；收集共培养后的A549细胞，CCK-8法检测细胞活性，肿瘤细胞成球实验检测自我更新能力，Western blot法检测干性标志蛋白分化抗原簇蛋白133(CD133)、跨膜黏附分子(CD44)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、八聚体结合转录因子4(OCT4)表达。结果 与对照组或LV-NC组比较，LV-TIPE2组RAW264.7细胞中TIPE2 mRNA和蛋白相对表达量均显著上调。与对照组比较，TAM组RAW264.7细胞中M2型巨噬细胞标志物CD206蛋白荧光强度明显增加，M1型巨噬细胞比例显著减少，M2型巨噬细胞比例显著增加；与TAM组比较，LV-TIPE2组RAW264.7细胞中CD206蛋白荧光强度明显减弱，M1型巨噬细胞比例显著增加，M2型巨噬细胞比例显著减少。与对照组比较，TAM组A549细胞增殖活性显著升高，肿瘤成球数目显著增加，CD133、 CD44、 SOX2、 OCT4的相对表达量显著上调；与TAM组比较，LV-TIPE2组A549细胞增殖活性显著下降，肿瘤成球数目显著减少，同时，CD133、 CD44、 SOX2、 OCT4蛋白相对表达量显著下调。结论 TIPE2通过抑制巨噬细胞向M2型极化抑制肺癌细胞干性特征，发挥抗癌作用。
关键词：巨噬细胞;;肺癌;;肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样因子2(TIPE2);;干性
基金资助：河南省科技厅科技攻关项目(242102310240);; 河南省卫健委医学科技攻关联合共建项目(LHGJ20221021)
