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作者：屠泽文;王全胜;刘仕国;刘浩森;曾春燕;谢娟娟;李名志;李精彩;王敏;翁诗琦;康路妹;孔令保;
单位：江西农业大学生物科学与工程学院;南昌市动物病毒与基因工程重点实验室;南昌大学第二附属医院临床实验科;江西农业大学动物科技学院;南昌大学实验动物科技中心;
摘要：目的 旨在研究新型冠状病毒Omicron(BA.1、 BA.2)N蛋白的免疫学功能，并评估不同新冠病毒突变株N蛋白的免疫原性差异。方法 运用序列比对确定Omicron(BA.1、 BA.2)N蛋白相对新冠病毒原型株(Wuhan-Hu-1)的突变位点，以pET-28a-N-Wuhan-Hu-1质粒为模板经单点突变或同源重组构建pET-28a-BA.1/BA.2-N。利用原核系统分别表达上述三种N蛋白，经Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠。运用间接ELISA和Western blot法检测多克隆抗体的效价和反应性以及免疫小鼠脾脏细胞中白细胞介素1β(IL-1β)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平。结果 成功利用构建的原核表达质粒在E.coli BL21(DE3)中表达了Wuhan-Hu-1 N、 BA.1 N和BA.2 N蛋白，表达条件为37℃, 4 h。间接ELISA试验测得三种N蛋白制备的多克隆抗体效价均为1∶51200。三种N蛋白均可使IFN-γ和IL-1β两种细胞因子表达升高，但是Omicron N蛋白较Wuhan-Hu-1 N蛋白激活两种细胞因子的效果更为明显。结论 研究获得了三种新冠病毒N蛋白及多克隆抗体，并证实了N蛋白发生氨基酸位点的突变会对其免疫原性产生影响。这为开发针对不同新冠变异株N蛋白的快速诊断方法提供了依据。
关键词：多克隆抗体;;Omicron;;核衣壳蛋白;;γ干扰素(IFN-γ);;白细胞介素1β(IL-1β)
基金资助：国家自然科学基金(32360908);; 江西省自然科学基金重点项目(20224ACB205004);; 南昌市动物病毒与基因工程重点实验室项目(31860038)
