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作者：郭地;刘莹;刘杨;
单位：山西中医药大学基础医学院;
摘要：目的 构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络，探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎（AIH）小鼠模型中的潜在调控机制，并验证关键基因的表达与肝损伤的关系。方法 使用高通量数据筛选差异表达的circRNA、miRNA和mRNA，基于Pearson相关分析和Miranda程序预测miRNA与mRNA及circRNA的配对关系，构建ceRNA网络。对网络中的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。选取SPF级雄性C57BL/6小鼠12只，采用随机数字表法分为对照组和模型组，每组6只，模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A构建AIH小鼠模型，对照组注射生理盐水。通过qRT-PCR和Western Blot方法验证circ＿0001577、mi R-7055-3p和Akt3的表达。测定血清转氨酶（ALT、AST）和肝组织中丙二醛（MDA）及一氧化氮（NO）含量，并分析其与基因表达的相关性。计量资料两组间比较采用成组t检验。使用Spearman相关分析法分析基因表达与肝损伤指标之间的相关性。结果 构建了包含5 795个circ RNAmi RNA-m RNA配对的ce RNA网络，发现circ＿0001577为中心基因。与对照组小鼠比较，模型组中的circ＿0001577和Akt3表达上调，miR-7055-3p下调，差异均有统计学意义（P值均<0.05），且circ＿0001577与Akt3呈正相关（r=0.861,P<0.001）,miR-7055-3p与两者呈负相关（r值分别为-0.644、-0.855,P值均<0.05）。模型组小鼠肝脏Akt3蛋白表达显著高于对照组（1.04±0.10 vs 0.72±0.06,t=-6.49,P=0.001），并与circ＿0001577呈正相关（r=0.579,P=0.048），与mi R-7055-3p呈负相关（r=-0.891,P<0.001）。模型组小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA、NO含量较对照组均显著增加（P值均<0.05），上述肝损伤指标与circ＿0001577、Akt3呈正相关（r值分别为0.849、0.865、0.811、0.801;0.889、0.954、0.938、0.961,P值均<0.05），与miR-7055-3p呈负相关（r值分别为-0.687、-0.818、-0.833、-0.870,P值均<0.05），且与Akt蛋白表达呈正相关（r值分别为0.648、0.796、0.848、0.860,P值均<0.05）。结论 circ＿0001577通过竞争性吸附miR-7055-3p，导致Akt3抑制被解除，进而促进Akt3的表达，参与AIH的发生发展。circ＿0001577及其相关通路可能成为AIH的潜在治疗靶点。
关键词：肝炎,自身免疫性;;RNA,环状;;微RNAs;;RNA,信使;;小鼠,近交C57BL
基金资助：国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目（2024）;; 中西医结合防治风湿免疫病山西省科技创新人才重点团队（202204051002033）;; 山西省科学技术厅山西省重点国别科技合作项目（202104041101013）;; 山西省应用基础研究计划青年科学基金项目（202203021222272）;; 山西省中医药管理局科研项目（2024ZYYAD008）;; 山西中医药大学科技创新团队项目（2022TD2003）;; 中西医结合治疗风湿免疫疾病重点实验室（zyyyjs2024021）~
