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作者：张金霞;曹莹;张昊文;刘德鹏;李铎;王晓冉;田似报;吴香菊;齐静;周萌;王先炜;杜以军;
单位：南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室;山东省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽生物组学重点实验室;济南市企业服务中心;
摘要：旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析，确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点；设计猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体引物，定点突变猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点，构建猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体质粒并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)验证表达；通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)试验、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验及免疫共沉淀(Co-IP)试验研究猪TRIM56及其E3泛素连接酶活性突变体在STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。结果：猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体构建成功；猪TRIM56促进STING介导的干扰素β(IFN-β)mRNA水平和启动子活性，促进STING K63连接的多聚泛素化修饰，而猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体没有显著促进作用。本研究为后续开展猪TRIM56在抗病毒天然免疫中的作用提供了有效工具。
关键词：猪TRIM56;;E3泛素连接酶;;定点突变;;STING
基金资助：中央引导地方基金发展项目(YDZX2024019);; 山东省科技型中小企业创新能力提升项目(2024TSGC0274);; 山东省农业科学院农业科技创新项目(CXGC2024D10,CXGC2025A04)
