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作者：瑞雪;张云航;李杨;谭晨;蔡艺菲;刘园园;曹宗喜;张艳;孙瑞萍;刘光亮;
单位：新疆农业大学动物医学学院;海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室;中国农业科学院兰州兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室;
摘要：旨在建立同时检测猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus, PERV)3种亚型的多重荧光定量PCR方法。扩增PERV囊膜基因env,构建重组质粒pMD-PERV-A、pMD-PERV-B、pUC-PERV-C作为标准品，建立了三重实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法标准曲线，并对该方法进行特异性、敏感性及重复性试验验证。结果：重组质粒标准品的拷贝数与Ct值呈良好的线性关系，PERV-A、PERV-B和PERV-C分别为：y=-3.363x+39.923,R~2=0.993,扩增效率(E)=98.3%;y=-3.546x+41.090,R~2=0.997,E=91.4%;y=-3.559x+40.618,R~2=0.998,E=91%。特异性试验结果显示该方法能特异性检测PERV,而对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应；三重RT-qPCR敏感性均可达到1×10~2 copies/μL;批内及批间重复性试验变异系数均小于2%。使用该方法对107份五指山猪组织样品进行临床样品的检测，经过与传统检测方法进行对比，PERV-A、PERV-B、PERV-C阳性符合率分别为100%、100%、97.5%。综上，本试验所建立的检测方法能够同时定量分析PERV-A、PERV-B、PERV-C这3种亚型，且有较高的检测效率，能够为异种移植供体筛选提供前期的技术支持。
关键词：猪内源性逆转录病毒;;囊膜基因;;荧光定量PCR;;TaqMan探针
基金资助：科技部重点研发计划前沿生物技术专项课题项目(2021YFA0805905);; 海南省重大科技计划项目(ZDKJ2021030);; 国家重点研发计划课题项目(2023YFC3404302)
