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作者：张艳琳;吴松;郭倩茹;余云涛;王孙伊;韦禹岐;万小曼;路珍;何晓茹;
单位：湖北中医药大学针灸骨伤学院/针灸治未病湖北省协同创新中心;湖北时珍实验室;
摘要：目的：观察“标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心肌细胞线粒体分裂的影响，并探讨其作用机制。方法：将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针预处理组、电针预处理+Compound C组和电针预处理+ML385组，各10只。电针预处理组、电针预处理+Compound C组和电针预处理+ML385组于双侧“内关”“足三里”和“关元”行电针干预20 min，连续波，频率2 Hz，电流1 mA，每日1次，连续7 d。第8天，电针预处理+Compound C组和电针预处理+ML385组于造模前30 min分别腹腔注射Compound C溶液（0.3 mg/kg）和ML385溶液（30 mg/kg）。除假手术组外，其余组大鼠均采用冠状动脉左前降支结扎法建立MIRI大鼠模型，假手术组穿线不结扎。造模结束后，采用流式细胞仪检测缺血区心肌组织活性氧（ROS）含量，黄嘌呤氧化酶法检测缺血区心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）含量，硫代巴比妥酸比色法检测缺血区心肌组织丙二醛（MDA）含量，HE染色法观察缺血区心肌组织形态，透射电镜观察缺血区心肌细胞线粒体超微结构，免疫荧光法检测缺血区心肌组织线粒体分裂因子（MFF）、线粒体裂变1蛋白抗体（Fis1）和动力蛋白相关蛋白1(Drp1)阳性表达，免疫组织化学法检测缺血区心肌组织腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、核因子E2相关因子2(Nrf2)和Drp1蛋白表达。结果：与假手术组比较，模型组缺血区心肌组织ROS、MDA含量及MFF、Fis1、Drp1阳性表达均升高（P<0.01）,SOD含量及AMPK、Nrf2蛋白表达均降低（P<0.01）,Drp1蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较，电针预处理组缺血区心肌组织ROS、MDA含量及MFF、Fis1、Drp1阳性表达均降低（P<0.01）,SOD含量及AMPK、Nrf2蛋白表达均升高（P<0.01）,Drp1蛋白表达降低（P<0.01）；电针预处理+Compound C组和电针预处理+ML385组缺血区心肌组织MFF、Fis1、Drp1阳性表达及Drp1蛋白表达均降低（P<0.01）。与电针预处理+Compound C组和电针预处理+ML385组比较，电针预处理组缺血区心肌组织ROS、MDA含量及MFF、Fis1、Drp1阳性表达均降低（P<0.01）,SOD含量及AMPK、Nrf2蛋白表达升高（P<0.01, P<0.05）,Drp1蛋白表达降低（P<0.05）。与模型组、电针预处理+Compound C组和电针预处理+ML385组比较，电针预处理组心肌纤维断裂程度、细胞肿胀程度、线粒体紊乱破碎程度均明显减轻，模型组、电针预处理+Compound C组和电针预处理+ML385组心肌纤维断裂程度、细胞肿胀程度、线粒体紊乱破碎程度较为接近。结论：“标本配穴”电针预处理可能通过促进AMPK和Nrf2磷酸化，抑制Drp1诱导的线粒体过度分裂，减轻线粒体碎片化和空泡化引起的线粒体功能障碍，从而减轻MIRI大鼠心肌损伤。
关键词：心肌缺血再灌注损伤;;电针;;标本配穴;;预处理;;线粒体分裂;;AMPK;;Nrf2;;Drp1
基金资助：2022年国家中医药管理局青年岐黄学者培养项目：国中医药人教函[2022]256号;; 全国名老中医药专家传承工作室建设项目：国中医药人教函[2022]75号
