来源：期刊VIP网 时间：
作者：朱伟娟;王章;刘洪;唐程林;刘志刚;衣萌萌;王淼;曹建萌;可小丽;
单位：中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室;上海海洋大学水产生命学院;
摘要：为研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)表皮生长因子受体基因EGFR(epidermal growth factor receptor)在无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染过程中的作用，采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)技术分别检测了该基因在无乳链球菌感染前后，以及脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidy acid,Ploy I∶C)刺激前后罗非鱼各组织的表达水平;同时运用免疫荧光检测技术，对无乳链球菌感染前后罗非鱼中肠组织EGFR蛋白的表达进行了定位分析。结果表明:罗非鱼EGFR基因c DNA序列长度为5 405 bp，开放阅读框(ORF)为3 621 bp，可编码1 206个氨基酸;该基因具有EGFRX1、X2和X3 3个不同mRNA剪接异构体;其中EGFRX1和EGFRX2含有1个跨膜结构域，EGFRX3则不含跨膜结构域; EGFRX1、EGFRX2、EGFRX3的蛋白质序列间一致性为77.86%;经无乳链球菌感染后，脾表达量显著降低(P<0.05);肠、肝脏24 h表达量显著升高(P<0.05);经Ploy I∶C刺激后，肠组织表达量显著升高，8 h达峰值;鳃、脾EGFR基因表达量呈先上升后下降再上升趋势; EGFR蛋白在罗非鱼中肠浆膜、黏膜层、黏膜下层和肌肉层中均有阳性表达，感染无乳链球菌后，肠道浆膜层中的EGFR蛋白分布密度和阳性面积占比均显著上升(P<0.05)，且黏膜层杯状细胞明显增多。研究表明，罗非鱼EGFR不同剪切体可能存在功能差异，EGFR基因的表达与罗非鱼黏膜免疫功能相关，且EGFR蛋白可能通过促进黏液分泌来增强肠道屏障的修复，本研究结果为后续罗非鱼EGFR基因的功能解析提供了有益参考。
关键词：尼罗罗非鱼;;表皮生长因子受体;;无乳链球菌;;基因表达;;免疫组化
基金资助：财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系资助(CARS-46);; 国家自然科学基金(32102834);; 广东省基础与应用基础研究基金(2021A1515010852);; 2022年水产种业体系建设—罗非鱼“育繁推”一体化育种科企联合体(粤财农[2022]119号)
