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作者：张梦婷;黄婷;刘欣妍;李婧;吴晚虹;黄草心;蔡腾;王梦缘;赵能江;刘素嬛;杨叔禹;
单位：福建中医药大学中医学院;厦门大学附属第一医院;
摘要：目的 探讨疏泄方改善昼夜节律紊乱引起肝脂质堆积的可能作用机制。方法 240只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、疏泄方低剂量组、疏泄方高剂量组和阿戈美拉汀组，每组48只。除对照组外，其余各组小鼠采用光剥夺方式建立昼夜节律紊乱模型小鼠。造模2周后疏泄方低、高剂量组小鼠每10 g体质量分别给予疏泄方0.15、0.31 g/d灌胃，阿戈美拉汀组小鼠每10 g体质量给予阿戈美拉汀片0.03 mg/d灌胃，对照组和模型组小鼠每10 g体质量给予0.1 ml/d蒸馏水灌胃，各组均每天灌胃1次，共灌胃2周。最后一次给药次日，采用跑轮实验观察小鼠日间（8:00—20:00）和夜间（20:01—8:00~(+1)）转数总和；采用代谢笼记录小鼠24 h不同时间[北京时间11:00(ZT3)、15:00(ZT7)、19:00(ZT11)、23:00(ZT15)、3:00~(+1)(ZT19)、7:00~(+1)(ZT23)]摄食量；比色法检测不同时间各组小鼠肝脏甘油三酯（TG）水平；HE染色法观察肝组织病理形态；免疫荧光法检测围脂滴蛋白1(perilipin1)免疫荧光密度；RT-qPCR和Western Blot法分别检测脑和肌肉芳香烃受体核转运蛋白样蛋白1(Bmal1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1a(PGC-1a) mRNA表达和蛋白水平。结果 对照组、疏泄方低剂量组和阿戈美拉汀组夜间跑轮转数总和较本组日间显著升高（P<0.01）；与对照组同时间比较，模型组小鼠日间跑轮转数总和显著增加（P<0.01）；与模型组同时间比较，疏泄方低剂量组和阿戈美拉汀组日间跑轮转数总和显著降低，疏泄方低剂量组在ZT7时摄食量显著减少（P<0.05）。肝脏病理结果显示，对照组、阿戈美拉汀组及疏泄方低、高剂量组小鼠肝细胞形态规则，而模型组小鼠肝细胞排列紊乱、少量空泡状细胞。与对照组同时间比较，模型组ZT11和ZT15时TG含量显著升高，ZT15时肝脏组织perilipin1蛋白免疫荧光密度增强，Bmal1 mRNA表达量在ZT3、ZT7显著升高，Bmal1蛋白及其mRNA在ZT15时显著降低，ZT11时PGC-1a mRNA表达及其蛋白水平降低，ZT15时PGC-1a mRNA表达及其蛋白水平升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组同时间比较，ZT15时疏泄方低剂量组及阿戈美拉汀组TG含量降低；疏泄方低、高剂量组perilipin1蛋白免疫荧光密度减弱；疏泄方低剂量组在ZT7时Bmal1 mRNA表达量降低，Bmal1蛋白水平在ZT3、ZT11和ZT15时均升高，ZT11时PGC-1a mRNA表达及其蛋白水平升高，ZT15时PGC-1a mRNA表达及其蛋白水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论 低剂量疏泄方可调控昼夜节律紊乱，改善肝脏脂质堆积，其机制可能通过有效调节肝脏Bmal1、PGC-1a mRNA表达及蛋白水平发挥降低肝TG的作用有关。
关键词：昼夜节律;;肝脏;;脂质堆积;;生物钟基因;;脑和肌肉芳香烃受体核转运蛋白样蛋白1;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1a;;疏泄方
基金资助：国家自然科学基金(82474415,82305075);; 福建省自然科学基金(2024J01778);; 福建省中青年教师教育科研项目(JAT220151)
